Cy5-炔烃Cyanine5 alkyne

概述

Cy5-炔烃（Cyanine 5 alkyne）是一种远红光区花青素荧光染料衍生物，带有炔基官能团。其激发/发射峰约为 640/664 nm，具有高消光系数（250,000 L·mol⁻¹·cm⁻¹）和量子产率（0.2），对 pH 不敏感，适合使用 633 nm 或 647 nm 激光激发。炔基可通过铜催化点击化学反应（CuAAC）与叠氮化合物高效偶联，形成稳定的三唑连接，用于标记蛋白质、抗体、核酸等生物分子，广泛应用于生物标记、细胞成像、蛋白质翻译后修饰分析及生物传感器构建。

理化性质

• 外观：深蓝色固体
• 分子式：C₃₇H₄₄ClN₃O（基于典型结构，具体以产品标签为准）
• 分子量：约 582.2 g/mol（游离碱）
• 溶解性：易溶于氯仿、甲醇、乙腈、DMF 等有机溶剂，微溶于水
• 荧光特性：
• 激发波长（Ex）：~640 nm
• 发射波长（Em）：~664 nm
• 消光系数：250,000 L·mol⁻¹·cm⁻¹
• 量子产率：0.2
• 稳定性：对 pH 不敏感，避光、干燥条件下稳定

应用领域

• 生物分子标记：通过 CuAAC 点击反应标记叠氮修饰的蛋白质、抗体、核酸（DNA/RNA）等。
• 细胞成像：远红光荧光成像，适用于活细胞或固定细胞的标记与追踪。
• 蛋白质翻译后修饰分析：如检测叠氮标记的糖基化或乙酰化修饰。
• 生物传感器构建：利用点击化学固定或标记识别元件。
• 多色荧光分析：与绿色/红色荧光染料组合，用于多重检测。

实验方案建议

1. 点击反应标记（CuAAC）通用流程

• 试剂准备：将 Cy5-炔烃溶解于 DMSO 或 DMF 中，配制成 10 mM 储备液（避光保存）。
• 反应体系（典型 100 μL）：
• 叠氮修饰的生物分子（如蛋白质 10-50 μg）
• Cy5-炔烃（终浓度 10-50 μM）
• CuSO₄（终浓度 1 mM）
• 抗坏血酸钠（终浓度 5 mM，新鲜配制）
• 配体（如 TBTA，终浓度 100 μM，可选，用于提高反应效率）
• 缓冲液：PBS（pH 7.4）或 50 mM Tris-HCl（pH 7.5）
• 反应条件：室温避光反应 1-2 小时（蛋白质）或 2-4 小时（核酸）。
• 纯化：通过透析、凝胶过滤或乙醇沉淀去除未反应的染料。

2. 细胞成像建议

• 标记：对叠氮修饰的细胞（如代谢标记）进行点击反应，Cy5-炔烃终浓度 5-20 μM，反应 30-60 分钟。
• 洗涤：用 PBS 洗涤 3 次，去除游离染料。
• 成像：使用 633/647 nm 激光激发，收集 660-680 nm 发射信号。

3. 注意事项

• 点击反应中 Cu⁺ 可能对生物分子造成损伤，可添加氨基胍或使用无铜点击化学（如 DBCO-叠氮）作为替代。
• 染料储备液应避光保存，避免反复冻融。
• 反应体系中的还原剂（如 DTT、β-巯基乙醇）可能干扰 CuAAC，需去除。

储存条件

• 储存温度：-20℃ 避光干燥保存
• 保质期：自收到之日起 12 个月（正确储存条件下）
• 注意事项：
• 避免反复冻融，建议将储备液分装后于 -20℃ 或 -80℃ 保存。
• 储备液（DMSO/DMF）需避光，可在 -20℃ 下保存 1 个月。
• 保持干燥，避免吸潮。

相关产品推荐

• Cy5-叠氮：用于与炔烃修饰分子的点击反应。
• Cy5-NHS 酯：用于标记伯胺（如蛋白质赖氨酸残基）。
• Cy5-马来酰亚胺：用于标记巯基（如抗体铰链区）。
• 其他花青素染料：Cy3、Cy7 系列，用于多色荧光成像。
• 点击化学辅助试剂：CuSO₄、抗坏血酸钠、TBTA 配体、叠氮修饰试剂盒。