Cy5-甲基 羧酸（远红外）Cy5-M Free Acid (FIR)

概述

Cy5-甲基 羧酸（远红外）是一种基于花菁染料Cy5的远红外荧光标记试剂，货号PR01306，CAS号1032678-07-1（氯盐形式）。该产品为游离羧酸形式，可通过常规羧酸活化方法（如EDC/NHS）与含氨基的生物分子或材料共价偶联，实现远红外荧光标记。其最大激发/发射波长约为650/670 nm，适用于生物成像、流式细胞术、免疫荧光等多种应用。

关键参数：

• 分子式：C₃₂H₃₉ClN₂O₂（氯盐）
• 分子量：约535.1 g/mol（氯盐）
• 外观：蓝色固体
• 纯度：≥95%（HPLC）
• 荧光量子产率：约0.2-0.3（取决于环境）
• 消光系数：~250,000 M^-1cm^-1（650 nm）

理化性质

应用领域

• 生物分子标记：用于标记蛋白质、抗体、多肽、核酸等含氨基的生物分子，适用于免疫荧光、Western blot、流式细胞术等。
• 细胞成像：远红外荧光穿透性强，适合细胞和组织成像，尤其是深层组织观察。
• 活体成像：由于远红外光在生物组织中散射低，可用于小动物活体荧光成像。
• 荧光探针构建：作为荧光报告基团，用于构建FRET探针、环境敏感型探针等。
• 材料科学：用于功能材料（如纳米颗粒、聚合物）的荧光标记与追踪。
• 多色荧光分析：与绿色、红色荧光染料组合，用于多重检测。

实验方案建议

1. 标记实验（以蛋白质为例）

• 缓冲液准备：使用无氨基的缓冲液（如PBS、碳酸盐缓冲液，pH 8.0-8.5）。避免使用Tris、甘氨酸等含氨基缓冲液。
• 染料活化：将Cy5-甲基 羧酸溶解于无水DMF或DMSO（终浓度通常为10 mM）。加入EDC（摩尔比1:1.2）和NHS（摩尔比1:2），室温活化15-30分钟。
• 偶联反应：将活化后的染料加入蛋白质溶液（质量比染料:蛋白质=1:5至1:10），室温避光反应1-2小时。
• 纯化：使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或透析去除游离染料。
• 验证：通过紫外-可见分光光度计测定标记效率（A₆₅₀/A₂₈₀比值）。

2. 细胞成像实验

• 将标记好的抗体或探针与细胞孵育，洗涤后使用远红外滤光片（Ex/Em ~650/670 nm）进行荧光显微镜观察。
• 建议设置未标记对照以排除自发荧光。

3. 活体成像实验

• 将标记探针通过尾静脉或局部注射入动物模型，使用活体成像系统（如IVIS）在650 nm激发、670 nm发射下采集图像。
• 注意染料的光漂白和淬灭，建议使用抗淬灭封片剂。

4. 注意事项

• 染料溶液应现配现用，避免反复冻融。
• 操作时避光，使用棕色离心管或铝箔包裹。
• 优化染料与配体的比例以避免过度标记导致的荧光淬灭。
• 对于不同应用，建议预实验确定最佳标记条件。

储存条件

• 储存温度：-20°C，干燥避光保存。
• 储存形式：固体粉末或溶于无水有机溶剂（如DMF、DMSO）的分装液。
• 稳定性：在推荐条件下可稳定保存12个月。溶液状态下建议分装后-80°C保存，避免反复冻融。
• 注意事项：避免暴露于强光、潮湿和高温环境；取用时平衡至室温后再打开瓶盖，防止吸潮。

相关产品推荐

• Cy5-NHS酯（货号：PR01307）：预活化的琥珀酰亚胺酯，可直接与氨基反应，简化标记流程。
• Cy5-马来酰亚胺（货号：PR01308）：用于巯基特异性标记。
• Cy5-叠氮化物（货号：PR01309）：用于点击化学标记。
• Cy3-甲基 羧酸（货号：PR01301）：绿色荧光染料，用于多色成像。
• Cy7-甲基 羧酸（货号：PR01311）：近红外荧光染料，适用于更深组织成像。
• EDC/NHS活化试剂盒（货号：PR10001）：用于羧酸活化偶联。
• Sephadex G-25脱盐柱（货号：PR10002）：用于标记后纯化。