磺酸基-Cy5-乙基 羧酸（远红外）Sulfo-Cy5-E Free Acid (FIR)

概述

磺酸基-Cy5-乙基羧酸（Sulfo-Cy5-E Free Acid）是一种远红外荧光染料，属于花菁染料家族。其CAS号为146368-11-8，货号PR01318。该产品具有高荧光量子产率、良好的光稳定性和水溶性，最大激发波长约为646 nm，最大发射波长约为662 nm，适用于生物标记和成像。

理化性质

• 化学名称：磺酸基-Cy5-乙基羧酸（内盐）
• 分子式：C₃₃H₄₀N₂O₈S₂
• 分子量：约656.8 g/mol
• 外观：深蓝色至深绿色粉末
• 溶解性：易溶于水、DMSO、DMF等极性溶剂
• 最大激发波长（λ_ex）：646 nm
• 最大发射波长（λ_em）：662 nm
• 荧光量子产率：高（在水溶液中）
• 储存条件：-20°C避光干燥保存
• 纯度：≥95%（HPLC）

应用领域

• 生物标记：用于标记蛋白质、抗体、多肽和核酸等生物分子，适用于流式细胞术、荧光显微镜和免疫荧光分析。
• 活体成像：远红外荧光穿透组织深度大，适用于小动物活体成像。
• 药物递送研究：作为荧光探针追踪药物载体分布。
• 诊断试剂开发：用于构建荧光免疫层析试纸条和生物传感器。
• 细胞成像：标记细胞膜或细胞内组分，进行长时间动态观察。

实验方案建议

1. 标记实验（以抗体标记为例）

• 缓冲液：使用无胺缓冲液（如PBS，pH 7.4）溶解抗体，避免使用含伯胺的缓冲液（如Tris）。
• 染料活化：将Sulfo-Cy5-E Free Acid溶于无水DMSO，配制成10 mM储备液。需使用EDC和NHS活化羧基（摩尔比染料:EDC:NHS = 1:1.5:1.5），室温反应15-30分钟。
• 标记反应：将活化染料加入抗体溶液（染料:抗体摩尔比建议5:1至10:1），避光室温反应1-2小时。
• 纯化：使用脱盐柱或透析去除游离染料。
• 验证：通过紫外-可见分光光度计测定标记度（DOL），计算A₆₄₆/A₂₈₀比值。

2. 成像实验

• 活体成像：建议染料用量为1-10 nmol/只小鼠，尾静脉注射，使用激发滤光片640/20 nm，发射滤光片680/20 nm。
• 细胞成像：工作浓度1-10 μM，孵育时间15-30分钟，PBS洗涤后成像。

3. 注意事项

• 避免反复冻融，储备液分装后-20°C避光保存。
• 反应体系避免含巯基化合物（如DTT、β-巯基乙醇）。
• 染料溶液应现配现用，避免长时间光照。

储存条件

• 粉末：-20°C避光干燥保存，有效期24个月。
• 溶液：-20°C避光保存，建议分装，避免反复冻融，有效期1个月。
• 运输条件：室温运输，避光防潮。

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