CY5-SE

概述

CY5-SE（Cy5 NHS Ester）是一种活性荧光染料，专用于标记肽、蛋白质和核苷酸中的伯氨基（-NH2）。其NHS酯基团可在温和条件下与氨基形成稳定的酰胺键。该染料激发波长640 nm，发射波长664 nm，适用于荧光显微镜、流式细胞术、免疫荧光等应用。产品货号PC22572，CAS号146368-14-1。

理化性质

• 化学名称：Cy5 NHS Ester
• CAS号：146368-14-1
• 分子式：C₃₇H₄₄N₃O₆·Cl（常见形式，实际以产品COA为准）
• 分子量：约666.23 g/mol
• 外观：深蓝色至紫色粉末
• 溶解性：易溶于DMSO、DMF等有机溶剂，微溶于水
• 激发波长：640 nm
• 发射波长：664 nm
• 摩尔消光系数：~250,000 M^-1cm^-1
• 荧光量子产率：~0.2（在水中）
• 储存条件：避光、干燥、-20°C保存

应用领域

• 蛋白质标记：用于抗体、酶等蛋白质的荧光标记，适用于免疫荧光、Western blot等。
• 多肽标记：标记合成多肽的N端或赖氨酸侧链氨基。
• 核苷酸标记：标记氨基修饰的寡核苷酸，用于FISH、微阵列等。
• 流式细胞术：标记抗体用于细胞表面抗原检测。
• 荧光显微镜：用于细胞和组织成像。
• FRET分析：作为供体或受体染料用于荧光共振能量转移研究。

实验方案建议

1. 染料储备液配制

• 将CY5-SE溶于无水DMSO或DMF，配制成10 mM储备液。建议现配现用，避免反复冻融。
• 储备液需避光保存，可分装后于-20°C储存。

2. 蛋白质标记（以IgG为例）

• 缓冲液：使用0.1 M碳酸氢钠缓冲液（pH 8.3-8.5），避免使用含氨基的缓冲液（如Tris、甘氨酸）。
• 标记比例：蛋白质浓度2 mg/mL，按染料:蛋白质摩尔比5:1至10:1加入CY5-SE储备液。
• 反应：室温避光反应1-2小时，或4°C过夜。
• 纯化：使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或透析去除游离染料。
• 验证：测定标记效率（DOL）和荧光光谱。

3. 多肽标记

• 多肽溶于pH 8.0-8.5的缓冲液，加入1.5-3倍摩尔过量的CY5-SE，室温避光反应2小时。
• 通过HPLC纯化标记产物。

4. 核苷酸标记

• 氨基修饰的寡核苷酸溶于0.1 M碳酸盐缓冲液（pH 8.5），加入10-20倍摩尔过量的CY5-SE，室温避光反应2-4小时。
• 乙醇沉淀或凝胶过滤纯化。

5. 注意事项

• 所有操作需避光进行。
• 反应体系避免含有伯胺的缓冲液。
• 染料水解会降低标记效率，储备液应避免水分。

储存条件

• 未开封产品：避光、干燥、-20°C保存，有效期见标签。
• 储备液：用无水DMSO或DMF配制后，分装避光保存于-20°C（可稳定数月），避免反复冻融。
• 运输条件：室温运输，收到后立即按上述条件储存。
• 注意事项：避免接触水分和胺类物质，防止染料水解。

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• DMSO（无水）：用于配制染料储备液。
• Sephadex G-25凝胶过滤柱：用于纯化标记产物。
• 碳酸氢钠缓冲液（pH 8.3）：标记反应用缓冲液。