Cy5-甲基 琥珀酰亚胺酯（远红外）Cy5-M SE (FIR)

概述

Cy5-甲基琥珀酰亚胺酯（远红外）是一种带有琥珀酰亚胺酯（NHS ester）反应基团的远红外荧光染料，货号PR01381，CAS号1263093-76-0。该染料的最大吸收/发射波长为648 nm/671 nm，属于远红外光谱区域。其NHS酯基团可在温和条件下与含伯氨基（-NH2）的生物分子（如蛋白质、多肽、抗体等）高效共价结合，形成稳定的酰胺键。该产品具有高光稳定性、较大的摩尔吸光系数以及优异的远红外荧光特性，适用于生物标记、成像及检测等多种实验场景。

理化性质

*注：以上理化数据为典型值，具体批次可能略有差异，请以产品质检报告为准。*

应用领域

• 蛋白质与抗体标记：用于标记抗体、蛋白质、多肽等含伯氨基的生物分子，适用于免疫荧光、Western blot、流式细胞术等。
• 细胞与组织成像：远红外荧光穿透深度大，背景自发荧光低，适用于活细胞或组织切片的荧光成像。
• 体内成像：由于远红外光在生物组织中穿透性好，可用于小动物活体成像。
• 核酸标记：通过氨基修饰的寡核苷酸进行标记，用于FISH、微阵列等。
• 流式细胞术：多色分析中作为远红外通道染料，减少光谱重叠。
• 药物递送研究：标记纳米颗粒或药物载体，追踪其在体内的分布。

实验方案建议

1. 储备液配制

• 将产品从冰箱取出，平衡至室温后再打开瓶盖，避免吸潮。
• 推荐使用无水DMSO溶解，配制成1-10 mM的储备液。例如，取1 mg产品加入适量DMSO（根据分子量计算体积），充分溶解后分装，-20°C避光保存，避免反复冻融。

2. 标记反应（以抗体标记为例）

• 缓冲液：使用不含伯氨基的缓冲液（如PBS、碳酸氢钠缓冲液，pH 8.3-8.5）。避免使用Tris、甘氨酸等含氨基的缓冲液。
• 抗体准备：将抗体溶于上述缓冲液，浓度建议1-2 mg/mL。若抗体溶液含有叠氮钠或BSA，需先透析或脱盐去除。
• 反应比例：染料与抗体的摩尔比（DOL）建议初始为3-5:1，可根据需要优化。例如，对于1 mg抗体（约6.7 nmol），加入20-33 nmol染料（即2-3.3 μL的10 mM储备液）。
• 反应条件：室温避光反应1-2小时，或4°C过夜。
• 纯化：使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或透析去除游离染料。
• 验证：测定标记物的吸收光谱，计算DOL（Degree of Labeling）。通常DOL在2-5之间可获得较好信号。

3. 细胞成像实验

• 标记的抗体或探针稀释至适当浓度，孵育细胞，洗涤后使用配备Cy5滤光片组的荧光显微镜观察。
• 建议设置未标记对照和竞争抑制对照。

4. 体内成像实验

• 标记的探针通过尾静脉注射，使用活体成像系统（激发波长约640 nm，发射滤光片约670 nm）采集信号。

5. 注意事项

• 反应体系避免含有氨基的缓冲液（如Tris、甘氨酸）。
• 染料对光敏感，所有操作尽量避光。
• 标记后产物应避光保存于4°C（短期）或-20°C（长期），添加少量BSA（1-5 mg/mL）可稳定荧光。
• 计算DOL时，使用染料在648 nm的摩尔吸光系数和抗体在280 nm的吸光系数进行校正。

储存条件

• 未开封产品：-20°C避光、干燥保存，有效期见包装标签。
• 储备液：用无水DMSO配制的储备液可分装后于-20°C避光保存，避免反复冻融，建议6个月内使用。
• 标记产物：标记后的生物分子应避光保存于4°C（短期，数天至一周）或-20°C（长期，数月），可添加0.1% BSA或叠氮钠（若实验允许）以防腐。
• 运输条件：常温运输，收到后立即按上述条件储存。

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• DMSO（无水）：用于配制染料储备液。
• 脱盐柱（如Sephadex G-25）：用于纯化标记产物。
• PBS缓冲液（无氨基）：用于标记反应。