磺酸基-Cy5羧酸Sulfo-Cy5Free acid

概述

磺酸基-Cy5羧酸（Sulfo-Cy5-COOH），货号PR01320，CAS号146368-11-8，是一种水溶性荧光染料，属于Cy5系列的氰基染料衍生物。其化学结构在Cy5核心上引入了磺酸基（-SO₃H）和羧基（-COOH）功能团，显著提高了水溶性和生物相容性，减少了非特异性结合和自聚集。羧基可用于共价标记蛋白质、肽、核酸等生物分子，构建荧光探针。

理化性质

• 化学名称：磺酸基-Cy5羧酸
• CAS号：146368-11-8
• 分子式：C₃₂H₃₇N₂NaO₈S₂（基于典型结构，可能因盐形式而异）
• 分子量：约656.76 g/mol（游离酸）
• 外观：深蓝色至紫色粉末
• 溶解性：易溶于水、甲醇、DMF、DMSO等极性溶剂
• 荧光特性：激发波长（Ex）~646 nm，发射波长（Em）~662 nm（水中）
• 摩尔消光系数：~250,000 M⁻¹cm⁻¹
• 量子产率：~0.2（水中）
• 储存条件：避光、干燥、-20°C保存
• 稳定性：对光敏感，避免长时间光照；水溶液需现配现用

应用领域

• 生物标记：用于标记蛋白质、抗体、多肽、核酸等，进行荧光成像、流式细胞术、免疫荧光等。
• 荧光探针：构建基于FRET的探针，用于检测分子相互作用。
• 活细胞成像：水溶性好，适用于活细胞及组织成像。
• 药物递送研究：标记纳米颗粒或药物载体，追踪其体内分布。
• 诊断试剂开发：用于侧向层析、生物传感器等。

实验方案建议

1. 标记蛋白质（以抗体为例）

• 缓冲液：使用无胺缓冲液（如PBS，pH 7.4）溶解蛋白质，避免使用含伯胺的缓冲液（如Tris）。
• 染料活化：将Sulfo-Cy5-COOH溶于无水DMSO或DMF，配制成10 mM储备液。
• 活化羧基：加入等摩尔EDC和NHS（或Sulfo-NHS），室温反应15-30分钟，活化羧基。
• 偶联：将活化染料加入蛋白质溶液（染料:蛋白质摩尔比建议5-10:1），室温避光反应1-2小时。
• 纯化：使用脱盐柱或透析去除游离染料，通过测定A₆₄₆和A₂₈₀计算标记度（DOL）。

2. 标记核酸

• 修饰核酸：使用氨基修饰的核酸（如5'-NH₂-DNA），在碳酸盐缓冲液（pH 9.0）中与活化染料反应。
• 纯化：乙醇沉淀或HPLC纯化。

3. 细胞成像

• 固定细胞：标记的抗体或探针孵育细胞，洗涤后成像。
• 活细胞：染料可直接加入培养基（终浓度1-10 μM），孵育10-30分钟，洗涤后成像。

4. 注意事项

• 活化后的染料需尽快使用，避免水解。
• 避光操作，减少荧光淬灭。
• 优化染料与配体的比例，避免过度标记导致活性下降。

储存条件

• 粉末：避光、干燥、-20°C保存，有效期2年。
• 溶液：建议现配现用；如需保存，分装后-80°C避光冻存，避免反复冻融。
• 运输：室温避光运输，短期稳定。

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