磺酸基-Cy5-甲基 羧酸（远红外）Sulfo-Cy5-M Free Acid (FIR)

概述

磺酸基-Cy5-甲基 羧酸（远红外）是一种水溶性的远红外荧光染料，属于花菁染料家族。其最大激发波长约为646 nm，最大发射波长约为662 nm，适用于生物标记和成像应用。该产品以游离酸形式提供，CAS号为1144107-82-3（钾盐），相关CAS号包括1121756-16-8（内盐）和2098639-31-5（钠盐）。磺酸基团赋予其良好的水溶性，甲基羧酸基团可用于进一步的化学修饰。

理化性质

• 外观：深蓝色至深紫色固体粉末
• 分子式：C₃₅H₄₁N₂O₈S₂K（钾盐形式）
• 分子量：约 728.94 g/mol（钾盐）
• 溶解性：易溶于水、DMSO、DMF等极性溶剂
• 光谱性质：
• 激发波长（λ_ex）：646 nm
• 发射波长（λ_em）：662 nm
• 消光系数：~250,000 M^-1cm^-1
• 荧光量子产率：~0.2（在水中）
• 储存条件：-20°C避光干燥保存
• 稳定性：对光敏感，应避免长时间光照；在酸性条件下可能发生聚集

应用领域

• 生物分子标记：用于标记蛋白质、抗体、多肽和核酸，适用于流式细胞术、免疫荧光、Western blot等。
• 活细胞成像：远红外荧光穿透性好，适用于深层组织成像和活体成像。
• 药物递送研究：作为荧光探针追踪纳米载体或药物分布。
• FRET分析：作为受体或供体与其它荧光染料配对。
• 多色荧光分析：与其它荧光染料（如FITC、PE等）联合使用，进行多色流式分析。
• 小动物活体成像：远红外光组织自发荧光低，信噪比高。

实验方案建议

1. 标记实验（以蛋白质为例）

• 缓冲液准备：使用无胺缓冲液（如PBS，pH 7.4）溶解蛋白质，避免使用含伯胺的缓冲液（如Tris）。
• 染料活化：本产品为游离酸，需先活化羧基。推荐使用EDC/NHS活化：将染料溶解于DMSO（1 mg/mL），加入EDC和NHS（摩尔比染料:EDC:NHS = 1:1.5:2），室温反应15-30分钟。
• 标记反应：将活化后的染料加入蛋白质溶液（染料:蛋白质摩尔比建议5-10:1），避光反应1-2小时（4°C或室温）。
• 纯化：使用脱盐柱或透析去除游离染料。
• 验证：通过SDS-PAGE荧光成像或紫外-可见分光光度法测定标记效率（DOL）。

2. 细胞成像

• 染色：将染料溶解于DMSO配成储备液（1-10 mM），用无血清培养基稀释至工作浓度（1-10 μM），孵育细胞15-30分钟（37°C）。
• 洗涤：用PBS洗涤3次，去除未结合的染料。
• 成像：使用Cy5滤光片组（Ex 620-650 nm，Em 670-700 nm）进行荧光显微镜观察。

3. 活体成像

• 注射：将标记好的探针通过尾静脉或瘤内注射（剂量根据实验优化）。
• 成像：使用活体成像系统，激发波长640-660 nm，发射滤光片680-720 nm。

4. 注意事项

• 染料溶液应现配现用，避免反复冻融。
• 标记反应需避光进行。
• 优化染料与配体的比例以减少背景荧光。

储存条件

• 储存温度：-20°C避光干燥保存
• 储存形式：固体粉末或适当溶剂（如DMSO）中的储备液
• 有效期：自收到之日起12个月（正确储存条件下）
• 注意事项：
• 避免暴露于强光下，建议使用棕色瓶或铝箔包裹。
• 保持干燥，避免吸潮。
• 储备液可分装后于-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。
• 溶解后建议在1个月内使用。

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