磺化Cy5-伯胺Sulfo-Cyanine5 amine

概述

磺化Cy5-伯胺（Sulfo-Cy5-amine，货号PC21418，CAS号2183440-44-8）是一种基于Cyanine 5（Cy5）染料骨架改性的水溶性荧光标记试剂。其核心结构在Cy5的共轭体系两端引入了磺酸基（Sulfonic Acid），显著提高了水溶性。该产品具有远红光荧光特性（激发波长约649 nm，发射波长约672 nm），荧光量子产率高（约0.2-0.28），且在pH变化和光照下表现出极佳的稳定性。末端的伯胺基具有高度反应活性，可与生物分子中的羧基发生酰胺键反应，广泛用于蛋白质、抗体、多肽、核酸等生物分子的共价标记。

理化性质

应用领域

• 蛋白质与抗体标记：通过伯胺与羧基的酰胺键反应，实现抗体、蛋白质的荧光标记，用于免疫荧光、Western blot等。
• 多肽与核酸标记：标记多肽、寡核苷酸，用于荧光探针制备、FRET分析等。
• 细胞成像：远红光荧光穿透性强，背景低，适合活细胞或固定细胞的荧光显微成像。
• 流式细胞术：标记抗体用于多色流式分析，远红光通道减少光谱重叠。
• 活体成像：远红光组织自发荧光低，适用于小动物活体荧光成像。
• 荧光探针开发：作为荧光团构建传感器、分子信标等。

实验方案建议

1. 标记反应（以蛋白质为例）

• 缓冲液：使用不含伯胺的缓冲液（如PBS、碳酸盐缓冲液，pH 7.5-8.5）。避免使用Tris、甘氨酸等含胺缓冲液。
• 反应比例：建议染料与蛋白质的摩尔比为5-10:1，可根据预实验优化。
• 反应条件：室温避光反应1-2小时，或4°C过夜。
• 纯化：使用透析、超滤或凝胶过滤色谱去除游离染料。

2. 储存液配制

• 使用无水DMSO或DMF配制10 mM储存液，分装后-20°C避光保存，避免反复冻融。

3. 注意事项

• 反应体系需避光，防止荧光淬灭。
• 标记后需检测标记效率（如测定A₆₄₉和A₂₈₀，计算F/P比）。
• 对于羧基标记，需确保羧基被活化（如使用EDC/NHS），或采用本产品与羧基直接反应（需优化条件）。

储存条件

• 短期储存：2-8°C避光干燥保存，有效期数月。
• 长期储存：-20°C避光干燥保存，有效期至少2年。
• 储存液：使用无水DMSO或DMF配制后，-20°C避光保存，建议分装避免反复冻融。
• 注意事项：避免接触强光、潮湿和高温；避免与氧化剂接触。

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