磺酸基-Cy5-甲基 琥珀酰亚胺酯（远红外）Sulfo-Cy5-M SE (FIR)

概述

磺酸基-Cy5-甲基琥珀酰亚胺酯（远红外），货号PR01394，是一种水溶性远红外荧光染料，含有N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯活性基团，可与伯氨基（如蛋白质、多肽、抗体等）高效共价结合，形成稳定的酰胺键。该染料的最大激发波长约为646 nm，最大发射波长约为662 nm，适用于生物标记和成像。CAS号：2230212-27-6（钾盐），相关CAS号：937739-58-7（内盐）。

理化性质

• 外观：深蓝色至紫色固体粉末
• 分子式：C₃₇H₄₃N₃O₁₀S₂·K（钾盐）
• 分子量：约792.98 g/mol（钾盐）
• 溶解性：易溶于水、DMF、DMSO等极性溶剂
• 光谱性质：
• 最大激发波长（Ex）：~646 nm
• 最大发射波长（Em）：~662 nm
• 摩尔消光系数：~250,000 L·mol^-1·cm^-1
• 荧光量子产率：~0.2（在水中）
• 储存条件：-20°C避光干燥保存
• 稳定性：对光敏感，需避光保存；在干燥状态下稳定

应用领域

• 蛋白质标记：用于抗体、蛋白质的荧光标记，适用于Western blot、免疫荧光、流式细胞术等。
• 核酸标记：可标记氨基修饰的寡核苷酸，用于FISH、基因芯片等。
• 细胞成像：用于活细胞或固定细胞的远红外荧光成像，背景低，组织穿透性好。
• 小动物活体成像：远红外荧光适合小动物体内成像，用于药物分布、肿瘤靶向等研究。
• 多色荧光分析：与其他荧光染料（如FITC、Cy3、Cy7等）配合使用，进行多色检测。

实验方案建议

1. 储备液制备

• 将产品从冰箱取出，平衡至室温后再打开瓶盖，避免吸潮。
• 推荐使用无水DMSO或DMF溶解，配制浓度为1-10 mM的储备液。例如，取1 mg染料加入适量无水DMSO，充分溶解后分装，-20°C避光保存，避免反复冻融。

2. 标记反应（以抗体标记为例）

• 缓冲液：使用不含伯氨基的缓冲液（如PBS、碳酸氢钠缓冲液，pH 8.0-8.5）。避免使用Tris、甘氨酸等含氨基的缓冲液。
• 抗体准备：将抗体透析或超滤至标记缓冲液中，浓度建议≥2 mg/mL。
• 染料加入：按染料与抗体的摩尔比（通常为3-10:1）加入储备液，轻轻混匀，室温避光反应1-2小时。
• 纯化：使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或超滤离心管去除游离染料。
• 验证：测定标记抗体的DOL（Degree of Labeling）和荧光光谱，确保标记效率。

3. 注意事项

• 反应体系需避光，防止荧光淬灭。
• 染料储备液应现配现用，避免长时间存放。
• 标记过程中避免使用含氨基的缓冲液，以免竞争反应。
• 纯化后标记物可加入BSA（0.1%）稳定，4°C避光保存。

储存条件

• 未开封产品：-20°C避光干燥保存，有效期24个月。
• 溶解后：储备液分装后-20°C避光保存，避免反复冻融，建议6个月内使用。
• 运输条件：室温运输，避光防潮。

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