Cy5-马来酰亚胺Cyanine5 maleimide

概述

Cy5-马来酰亚胺（Cy5 Maleimide）是一种含有马来酰亚胺基团的Cy5荧光染料，货号PC21413，CAS号1437796-65-0。Cy5属于花菁染料家族，具有长波长激发和发射、高消光系数和良好的水溶性（但本产品水溶性较低）。马来酰亚胺基团可与巯基（-SH）特异性反应，形成稳定的硫醚键，因此常用于标记含半胱氨酸残基的蛋白质、抗体、多肽以及其他含巯基的分子。本产品为深蓝色固体，易溶于甲醇、DMF等有机溶剂，微溶于水。

理化性质

• 化学名称：Cy5-马来酰亚胺
• CAS号：1437796-65-0
• 分子式：C₃₆H₄₂ClN₃O₃（基于典型Cy5马来酰亚胺结构）
• 分子量：约600.19 g/mol
• 外观：深蓝色固体
• 溶解度：易溶于甲醇、DMF、DMSO等有机溶剂，微溶于水
• 光谱性质：
• 激发波长（λ_ex）：约649 nm
• 发射波长（λ_em）：约670 nm
• 消光系数：约250,000 M^-1cm^-1
• 反应基团：马来酰亚胺，特异性与巯基反应
• 储存条件：避光、干燥、-20℃保存

应用领域

• 蛋白质标记：用于标记含游离半胱氨酸的蛋白质，通过马来酰亚胺与巯基的迈克尔加成反应形成稳定偶联物。
• 抗体标记：用于制备荧光抗体偶联物，应用于免疫荧光、流式细胞术等。
• 多肽标记：标记含半胱氨酸的多肽，用于成像或检测。
• 小分子标记：标记含巯基的小分子化合物，用于示踪或分析。
• 细胞成像：标记细胞表面蛋白或穿膜肽，用于荧光显微镜成像。
• FRET分析：作为供体或受体染料，用于荧光共振能量转移研究。
• 生物传感器：构建基于荧光信号的生物传感器。

实验方案建议

1. 标记缓冲液准备

• 使用含1-5 mM EDTA的PBS（pH 7.2-7.5）作为反应缓冲液，EDTA可防止金属离子催化巯基氧化。
• 避免使用含游离巯基的缓冲液（如DTT、β-巯基乙醇），这些物质会竞争性消耗马来酰亚胺。

2. 蛋白/抗体预处理

• 确保蛋白/抗体含有游离巯基。若巯基形成二硫键，可使用TCEP（三(2-羧乙基)膦）或DTT还原，但需在标记前去除还原剂（如通过脱盐柱）。
• 推荐使用TCEP还原，因其不含巯基且不影响马来酰亚胺反应。

3. 染料溶解

• 将Cy5-马来酰亚胺用无水DMSO或DMF溶解，配制成10 mM储备液。避免使用含水的有机溶剂，以防马来酰亚胺水解。
• 储备液应避光保存，并尽快使用。

4. 标记反应

• 将蛋白/抗体溶液与染料储备液按一定摩尔比混合（通常染料:蛋白=5:1至10:1）。由于本产品水溶性较低，反应体系中需加入有机共溶剂（如DMSO或DMF），终浓度不超过10%（v/v）。
• 反应在避光、室温或4℃下进行1-2小时（室温）或过夜（4℃）。
• 反应体系pH应保持在6.5-7.5，pH过高会导致马来酰亚胺水解。

5. 纯化

• 反应结束后，使用脱盐柱（如Sephadex G-25）或透析去除游离染料。
• 可通过测定A₆₄₉和A₂₈₀计算标记度（DOL）。

6. 验证

• 使用SDS-PAGE或质谱验证标记效果。
• 通过荧光分光光度计检测偶联物的荧光特性。

注意事项

• 马来酰亚胺在水溶液中易水解，反应应在中性pH下尽快进行。
• 操作时避光，使用棕色离心管或铝箔包裹。
• 若标记分子对有机溶剂敏感，可选用磺化Cy5-马来酰亚胺（水溶性）。

储存条件

• 储存温度：-20℃避光保存，干燥环境。
• 保质期：在推荐条件下可稳定保存12个月。
• 注意事项：
• 避免反复冻融，建议分装保存。
• 保持干燥，防止吸潮。
• 避光保存，防止荧光淬灭。
• 储备液（DMSO或DMF溶液）应分装后-20℃避光保存，避免反复冻融，建议一个月内使用。

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