Cy3-甲基 琥珀酰亚胺酯（橙红色）Cy3-M SE (Orange Red)

概述

Cy3-甲基琥珀酰亚胺酯（橙红色）是一种含有活性琥珀酰亚胺酯（NHS ester）基团的橙色荧光染料，属于花菁染料Cy3的衍生物。该试剂可与蛋白质、多肽、抗体等生物分子中的伯氨基（-NH2）发生共价偶联，形成稳定的酰胺键，从而实现对生物分子的荧光标记。其最大激发波长约为550 nm，最大发射波长约为570 nm，适用于荧光显微镜、流式细胞术、免疫荧光等多种生物学检测。本品通常以四氟硼酸盐（BF4⁻）形式提供，CAS号为2632339-91-2，其他相关CAS号包括1032678-38-8（氯盐）、1032815-92-1（氯盐）和1393363-07-9（氯盐）。

理化性质

• 外观：橙红色固体
• 分子式：C₃₇H₄₃BF₄N₄O₄（以BF4⁻盐计，具体以实际结构为准）
• 分子量：约694.6 g/mol（BF4⁻盐）
• 溶解性：易溶于二甲基亚砜（DMSO）、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）等极性有机溶剂，微溶于水。
• 光谱性质：
• 激发波长（λ_ex）：~550 nm
• 发射波长（λ_em）：~570 nm
• 消光系数：~150,000 M⁻¹cm⁻¹
• 荧光量子产率：~0.1（在水中）
• 储存条件：-20°C避光干燥保存，避免反复冻融。
• 稳定性：对光敏感，在潮湿环境中易水解，应避免接触水分和胺类缓冲液（如Tris）。

应用领域

• 蛋白质与抗体标记：用于免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）、Western blot等，标记一抗或二抗。
• 核酸标记：通过氨基修饰的寡核苷酸进行荧光标记，用于FISH、qPCR探针等。
• 流式细胞术：标记细胞表面抗原的抗体，用于多色流式分析。
• 活细胞成像：标记细胞膜或胞内蛋白，进行动态追踪。
• 药物递送研究：标记纳米颗粒、脂质体等载体，追踪其体内分布。
• 生物传感器：构建荧光探针，检测生物分子相互作用。

实验方案建议

1. 试剂准备

• 缓冲液：使用不含伯氨基的缓冲液（如PBS、碳酸氢钠缓冲液，pH 7.4-8.5）。避免使用Tris、甘氨酸等含氨基的缓冲液。
• 染料储备液：将Cy3-M SE溶解于无水DMSO或DMF中，配制成10 mM储备液，避光保存，现配现用。

2. 标记步骤（以抗体标记为例）

• 抗体准备：将抗体透析或超滤至PBS（pH 7.4）中，浓度建议≥1 mg/mL。
• 反应：按染料:抗体摩尔比（通常5-10:1）加入Cy3-M SE储备液，轻轻混匀，室温避光反应1小时。
• 纯化：使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或超滤管去除游离染料。
• 验证：测定标记物的DOL（Degree of Labeling）和荧光强度。

3. 注意事项

• 反应体系pH应控制在7.5-8.5，以确保伯氨基的非质子化状态。
• 染料应过量以驱动反应完全，但过量可能导致背景升高。
• 标记后产物需避光保存，避免反复冻融。
• 对于不同生物分子，需优化染料与配体的比例。

储存条件

• 短期储存：4°C避光干燥保存，可稳定数周。
• 长期储存：-20°C避光干燥保存，建议分装避免反复冻融。
• 溶液储存：DMSO储备液应于-20°C避光保存，避免水分吸收，建议一个月内使用。
• 稳定性：在推荐条件下稳定，但应避免暴露于强光、高温和潮湿环境。

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