Cy3 NHS esterCyanine3 NHS ester

概述

Cy3 NHS Ester（货号：PL16031，CAS：2632339-91-2）是一种基于花菁染料Cy3的氨基反应性荧光标记试剂。其分子式为C₃₄H₄₀N₃BF₄O₄，分子量为641.5 g/mol。该试剂以四氟硼酸盐形式提供，具有优异的溶解性和高荧光量子产率，适用于蛋白质、核酸等生物分子的共价标记，广泛应用于荧光成像、流式细胞术及药物递送研究等领域。

理化性质

• 外观：红色粉末
• 分子式：C₃₄H₄₀N₃BF₄O₄
• 分子量：641.5 g/mol
• 溶解性：易溶于DMSO、DMF等有机溶剂，在水相中也有一定溶解度
• 荧光特性：激发波长（Ex）555 nm，发射波长（Em）570 nm；摩尔消光系数约150,000 L·mol^-1·cm^-1，荧光量子产率高
• 反应基团：NHS酯，可与伯氨基（-NH₂）高效反应形成稳定的酰胺键
• 储存条件：建议-20°C避光干燥保存

应用领域

• 蛋白质标记：用于抗体、酶等蛋白质的荧光标记，适用于免疫荧光、Western blot等
• 核酸标记：标记氨基修饰的寡核苷酸，用于FISH、基因芯片等
• 细胞成像：活细胞或固定细胞的荧光显微成像
• 流式细胞术：多色分析中的荧光探针
• 药物递送：追踪纳米载体或药物在体内的分布
• 生物传感器：构建荧光信号报告系统

实验方案建议

标记蛋白质（以IgG为例）的一般流程：

• 缓冲液准备：使用不含氨基的缓冲液（如PBS，pH 7.4或0.1 M碳酸氢钠缓冲液，pH 8.3）。避免使用Tris、甘氨酸等含氨基的缓冲液。
• 染料溶解：将Cy3 NHS Ester溶于无水DMSO，配制成10 mg/mL储备液（现配现用）。
• 标记反应：按染料与蛋白质摩尔比（通常5-10:1）将染料溶液加入蛋白质溶液中，轻柔混匀，室温避光反应1小时。
• 纯化：使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或透析去除游离染料。
• 验证：测定标记效率（DOL）和荧光光谱。

注意事项：

• 反应体系需避光，防止荧光淬灭。
• 染料储备液应避免水分，防止NHS酯水解。
• 标记后产物应在4°C避光保存，尽快使用。

储存条件

• 储存温度：-20°C，干燥避光
• 储存期限：自收到之日起12个月（按建议条件储存）
• 注意事项：避免反复冻融；染料溶液应分装保存，避免水分吸收；使用前平衡至室温再开盖，防止冷凝水。

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