磺酸基-Cy3-乙基 琥珀酰亚胺酯（橙红色）Sulfo-Cy3-E SE (Orange Red)

概述

磺酸基-Cy3-乙基 琥珀酰亚胺酯（Sulfo-Cy3-E NHS Ester）是一种基于Cyanine 3（Cy3）染料骨架改性的亲水性荧光标记试剂。通过在Cy3染料的苯环上引入磺酸基（Sulfonate Group），显著提升了水溶性，同时在染料分子末端连接了一个高活性的N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS酯）基团。该试剂在温和条件下（如室温、pH 7.2-8.5）可快速与生物分子的伯氨基（-NH2）发生酰胺键反应，具有高度选择性，适用于标记蛋白质、抗体、肽段和寡核苷酸等生物分子。

理化性质

• 化学名称：磺酸基-Cy3-乙基 琥珀酰亚胺酯
• CAS号：146368-16-3
• 货号：PR01389
• 分子式：C₃₅H₄₀N₃NaO₁₀S₂（基于典型结构，具体以实际产品为准）
• 分子量：约 765.8 g/mol
• 外观：橙红色固体粉末
• 溶解性：易溶于水、DMF、DMSO等极性溶剂
• 光谱性质：
• 激发波长（Ex）：约 550 nm
• 发射波长（Em）：约 570 nm
• 摩尔消光系数：~150,000 M^-1cm^-1
• 储存条件：-20°C避光干燥保存
• 稳定性：对光敏感，需避光保存；在干燥状态下稳定，溶液状态下建议现配现用

应用领域

• 蛋白质与抗体标记：用于免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）、Western Blot等检测。
• 核酸标记：标记寡核苷酸、DNA/RNA探针，用于FISH、qPCR探针等。
• 细胞成像：活细胞或固定细胞的荧光成像，追踪生物分子。
• 流式细胞术：标记抗体用于多色流式分析。
• 药物递送研究：标记纳米颗粒、脂质体等，追踪其体内分布。
• 生物传感器构建：作为荧光探针用于检测生物分子相互作用。

实验方案建议

1. 标记反应缓冲液准备

• 使用无氨基缓冲液（如PBS、碳酸氢钠缓冲液），pH 7.2-8.5。避免使用含伯氨基的缓冲液（如Tris、甘氨酸）。

2. 染料储备液配制

• 将产品从-20°C取出，平衡至室温后再打开瓶盖。
• 用无水DMSO或DMF溶解，配制成10 mM储备液（可根据需要调整）。建议现配现用，避免反复冻融。

3. 生物分子准备

• 待标记蛋白/抗体应溶于上述缓冲液中，浓度建议≥2 mg/mL。若含有BSA、明胶等含氨基稳定剂，需先透析或脱盐去除。

4. 标记反应

• 按染料:蛋白质摩尔比（通常5-10:1）将染料储备液缓慢加入蛋白溶液中，轻轻混匀。
• 室温避光反应1-2小时，或4°C过夜。

5. 纯化

• 使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或透析去除游离染料。

6. 标记效率检测

• 测定标记产物的A₅₅₀和A₂₈₀，计算染料/蛋白摩尔比（DOL）。
• 公式：DOL = (A₅₅₀ × ε_protein) / (ε_dye × A₂₈₀ × CF)，其中CF为染料在280 nm的校正因子（Cy3的CF≈0.08）。

7. 注意事项

• 全程避光操作。
• 反应体系避免含有叠氮钠（可能影响标记效率）。
• 标记后产物应避光保存于4°C，尽快使用。

储存条件

• 短期储存：4°C避光干燥保存，可稳定数月。
• 长期储存：-20°C避光干燥保存，建议分装避免反复冻融。
• 溶液储存：溶解后的储备液应分装并于-20°C避光保存，避免反复冻融，建议一个月内使用。
• 运输条件：室温运输，避光防潮。

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