Cy3-伯胺Cy3 amine

概述

Cy3-伯胺（Cyanine3 amine，Cy3-NH₂）是一种带有伯胺基团的橙红色荧光染料，货号PC21399，CAS号2247688-56-6。其最大激发/发射波长为555/570 nm，适用于荧光标记和探针构建。该染料可通过伯胺基团与NHS酯、羧基（经碳二亚胺活化）或环氧化物等反应基团共价偶联，实现对蛋白质、多糖、小分子及功能材料的荧光标记。

理化性质

• 外观：红色粉末
• 分子式：C₃₅H₄₆ClN₃O（基于典型Cy3胺结构，具体以产品质检报告为准）
• 分子量：约560.21 g/mol
• 溶解性：可溶于甲醇、DMF等有机溶剂，微溶于水
• 荧光特性：Ex/Em = 555/570 nm（在甲醇或缓冲液中测定）
• 纯度：≥95%（HPLC）
• 储存条件：避光、干燥、-20℃保存

应用领域

• 蛋白质标记：通过伯胺与NHS酯活化蛋白偶联，用于免疫荧光、Western blot等。
• 核酸标记：标记氨基修饰的寡核苷酸，用于FISH、qPCR探针等。
• 小分子标记：与含羧基的小分子（如药物、代谢物）偶联，构建荧光探针。
• 多糖标记：通过还原胺化或环氧化物开环反应标记多糖。
• 功能材料：修饰纳米颗粒、聚合物微球等材料表面，赋予荧光特性。
• 细胞成像：标记抗体或配体，用于细胞表面受体成像。

实验方案建议

1. 标记NHS酯活化蛋白（通用方案）

• 缓冲液：使用不含伯胺的缓冲液（如PBS、碳酸氢钠缓冲液，pH 7.5-8.5）。避免使用Tris、甘氨酸等含胺缓冲液。
• 步骤：
• 将目标蛋白（如IgG）溶解于PBS（pH 7.4）中，浓度建议1-5 mg/mL。
• 按摩尔比（染料:蛋白 = 5-10:1）加入Cy3-伯胺（先溶于无水DMF配制10 mM储备液）。
• 室温避光反应1-2小时。
• 使用脱盐柱或透析去除游离染料。
• 测定标记效率（DO₅₅₀/DO₂₈₀）和荧光光谱。

2. 标记羧基化材料（EDC/NHS活化）

• 活化缓冲液：MES缓冲液（pH 5.5-6.5）。
• 步骤：
• 将羧基化材料（如微球、芯片）用MES缓冲液洗涤。
• 加入EDC（终浓度2 mM）和NHS（终浓度5 mM），室温活化15-30分钟。
• 洗涤去除 excess EDC/NHS。
• 加入Cy3-伯胺（溶于MES缓冲液，终浓度0.1-1 mM），室温反应2-4小时。
• 洗涤，检测荧光。

3. 标记多糖（还原胺化）

• 缓冲液：碳酸盐缓冲液（pH 9.0-9.5）。
• 步骤：
• 多糖（如葡聚糖）氧化生成醛基（可选）。
• 加入Cy3-伯胺（摩尔比1-5:1），室温反应2小时。
• 加入NaBH₃CN（终浓度10 mM）还原，4℃过夜。
• 透析纯化。

4. 标记环氧化物功能化表面

• 缓冲液：碳酸盐缓冲液（pH 9.0-9.5）。
• 步骤：
• 环氧化物修饰的基底（如玻片、磁珠）用缓冲液平衡。
• 加入Cy3-伯胺（0.1-1 mM），37℃反应2-4小时或4℃过夜。
• 洗涤，检测荧光。

注意事项

• 所有反应需避光进行。
• 染料储备液建议用无水DMF或DMSO配制，现配现用。
• 反应体系避免含伯胺的试剂（如Tris）。
• 标记后样品应避光保存，尽快分析。

储存条件

• 短期储存：2-8℃，避光、干燥。
• 长期储存：-20℃，避光、干燥，建议充氩气或氮气。
• 溶液储存：溶解后分装，-20℃避光保存，避免反复冻融。
• 稳定性：在推荐条件下可稳定保存24个月。

相关产品推荐

• Cy3-NHS酯（货号：PC21398）：用于标记伯胺化蛋白或核酸。
• Cy5-伯胺（货号：PC21400）：远红色荧光染料，Ex/Em=650/670 nm。
• Cy3-马来酰亚胺（货号：PC21397）：用于标记巯基。
• Cy3-炔烃（货号：PC21396）：用于点击化学标记。
• Sulfo-Cy3-伯胺（货号：PC21401）：水溶性版本，适用于水相标记。