Cy5.5-叠氮Cyanine5.5 azide

概述

Cy5.5-叠氮（Cy5.5 azide，货号PC21421，CAS号1557136-25-0）是一种近红外荧光染料，含有叠氮基团，可通过点击化学反应标记含炔基或环张力炔基（如DBCO、BCN）的分子。其最大激发波长684 nm，最大发射波长710 nm，适用于DNA标记和近红外活体成像。

理化性质

• 外观：深蓝色固体
• 溶解性：可溶于氯仿、甲醇、乙腈、DMF等有机溶剂，微溶于水
• 荧光特性：λ_ex = 684 nm，λ_em = 710 nm（近红外区）
• 反应性：含叠氮基团，可参与铜催化的叠氮-炔环加成反应（CuAAC）和环张力驱动的炔-叠氮环加成反应（SPAAC）
• 储存条件：避光、干燥、-20℃保存

应用领域

• DNA标记：通过点击化学将Cy5.5荧光团标记到DNA分子上，用于检测或成像。
• 近红外活体成像：利用其近红外荧光特性，进行小动物活体成像，具有较好的组织穿透性。
• 点击化学标记：可与含炔基、DBCO或BCN的分子（如蛋白质、抗体、多肽、纳米颗粒等）发生CuAAC或SPAAC反应，实现荧光标记。
• 细胞成像：标记细胞表面或内部特定分子，用于荧光显微镜观察。

实验方案建议

1. 储存液配制

• 建议使用无水DMSO或DMF配制储备液（如1-10 mM），分装后避光保存于-20℃，避免反复冻融。

2. CuAAC反应（铜催化点击化学）

• 反应体系：含炔基的分子（如DNA、蛋白质）与Cy5.5-叠氮（1-10当量）在PBS缓冲液（pH 7.4）中混合，加入CuSO₄（终浓度0.1-1 mM）和还原剂（如抗坏血酸钠，终浓度1-5 mM），室温反应1-2小时。
• 注意事项：铜离子可能对某些生物分子活性有影响，建议优化铜浓度和反应时间；反应后可通过透析或凝胶过滤去除游离染料。

3. SPAAC反应（无铜点击化学）

• 反应体系：含DBCO或BCN的分子与Cy5.5-叠氮（1-5当量）在PBS或适当缓冲液中混合，室温反应2-4小时（或4℃过夜）。
• 注意事项：反应无需铜催化剂，适合活细胞或对铜敏感的体系；反应效率受pH影响，建议pH 7.0-7.4。

4. 标记DNA示例

• 将炔基修饰的DNA与Cy5.5-叠氮在CuAAC条件下反应，反应液经乙醇沉淀或HPLC纯化，得到荧光标记DNA。

5. 活体成像建议

• 标记后的探针通过尾静脉注射，使用近红外成像系统（激发滤光片680 nm，发射滤光片710 nm）进行成像；注意避光操作，减少背景荧光。

6. 纯化与验证

• 反应产物可通过透析、凝胶过滤或HPLC纯化；通过荧光分光光度计或凝胶电泳验证标记效率。

储存条件

• 未开封产品：避光、干燥、-20℃保存，有效期见标签。
• 储备液：用无水DMSO或DMF配制后，分装避光保存于-20℃，避免反复冻融，建议6个月内使用。
• 操作注意：避光操作，避免接触水分和氧化剂。

相关产品推荐

• Cy5.5-炔烃（货号：PC21422）：用于与叠氮标记的分子进行点击反应。
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