磺酸基-Cy5.5-乙基 羧酸（远红外）Sulfo-Cy5.5-E Free Acid (FIR)

概述

磺酸基-Cy5.5-乙基 羧酸（远红外）是一种水溶性的远红外荧光染料，属于花菁染料家族。其最大激发波长约为675 nm，最大发射波长约为694 nm，适用于生物标记和成像。该产品含有羧酸基团，可通过常规偶联化学与含氨基的生物分子（如蛋白质、抗体、多肽）共价结合，广泛应用于流式细胞术、免疫荧光、活体成像等领域。

理化性质

• 化学名称：磺酸基-Cy5.5-乙基 羧酸（内盐）
• CAS号：210892-23-2
• 分子式：C₃₇H₄₃N₂NaO₈S₂（基于典型结构，实际以产品为准）
• 分子量：约 722.86 g/mol
• 外观：深蓝色至深绿色粉末
• 溶解性：易溶于水、DMSO、DMF等极性溶剂
• 光谱性质：
• 激发波长（Ex）：~675 nm
• 发射波长（Em）：~694 nm
• 消光系数：~190,000 M^-1cm^-1
• 量子产率：~0.2（在水中）
• 储存条件：-20°C避光干燥保存

应用领域

• 生物标记：用于标记抗体、蛋白质、多肽等，进行免疫荧光染色、流式细胞分析。
• 活体成像：远红外荧光穿透组织深度较大，适用于小动物活体成像。
• 细胞成像：用于细胞表面或细胞内靶标的荧光成像。
• 核酸标记：通过氨基修饰的寡核苷酸进行标记。
• FRET分析：作为供体或受体染料用于荧光共振能量转移研究。
• 多色分析：与其他荧光染料（如FITC、PE、Cy3等）配合进行多色流式细胞术。

实验方案建议

1. 染料储备液配制

• 推荐使用无水DMSO或DMF配制储备液，浓度一般为1-10 mM。
• 储备液应分装避光保存于-20°C，避免反复冻融。

2. 生物分子偶联（以抗体为例）

• 缓冲液：使用不含氨基的缓冲液（如PBS，pH 7.4）透析或超滤去除抗体溶液中的 Tris、甘氨酸等干扰物质。
• 反应：按染料与抗体摩尔比（通常为5-10:1）加入染料储备液，室温避光反应1-2小时。
• 纯化：使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或超滤离心管去除游离染料。
• 验证：测定标记后的DOL（Degree of Labeling），通过紫外-可见分光光度法计算。

3. 细胞染色

• 对于固定细胞，可进行透化处理后与标记抗体孵育。
• 对于活细胞表面标记，标记抗体直接与细胞孵育后洗涤即可。
• 建议设置未标记对照和同型对照。

4. 活体成像

• 标记的探针通过尾静脉注射，使用相应激发和发射滤光片进行成像。
• 注意染料在体内的背景信号，建议设置未标记探针对照。

5. 注意事项

• 避免使用含伯胺的缓冲液（如Tris），以免与染料反应。
• 染料对光敏感，所有操作尽量避光。
• 标记后应尽快使用，或加入稳定剂（如BSA）分装冻存。

储存条件

• 粉末：-20°C避光干燥保存，有效期24个月。
• 储备液：-20°C避光保存，建议分装，避免反复冻融，有效期1个月。
• 运输条件：室温运输，避光防潮。

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