概述
Cy5.5 NHS ester(货号PL16032,CAS号910482-46-1)是一种近红外荧光染料衍生物,含有NHS酯基团,可与伯胺基团(如蛋白质、多肽、抗体等)高效反应形成稳定的酰胺键。该染料激发和发射波长位于近红外区域(约675 nm/694 nm),适用于生物标记、成像及检测应用。
理化性质
- 外观:深蓝色至深紫色粉末
- 分子式:C₄₃H₄₇N₃O₁₆S₄(基于典型结构,可能因异构体略有差异)
- 分子量:约978.1 g/mol
- 溶解性:易溶于二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)等有机溶剂,微溶于水
- 激发波长:~675 nm
- 发射波长:~694 nm
- 摩尔消光系数:~250,000 L·mol⁻¹·cm⁻¹
- 荧光量子产率:~0.3(在水中)
- 储存条件:-20°C避光干燥保存
应用领域
- 蛋白质/抗体标记:用于Western blot、免疫荧光、流式细胞术等。
- 核酸标记:通过氨基修饰的寡核苷酸进行荧光标记。
- 活体成像:近红外荧光适用于小动物活体成像,组织穿透深度大。
- 药物递送研究:标记纳米颗粒、脂质体等载体,追踪体内分布。
- 多色荧光检测:与可见光荧光染料组合用于多重分析。
实验方案建议
1. 标记缓冲液准备:使用不含伯胺的缓冲液(如PBS、碳酸氢钠缓冲液,pH 7.5-8.5)。避免使用Tris、甘氨酸等含氨基的缓冲液。
2. 染料溶解:将Cy5.5 NHS ester溶于无水DMSO或DMF,配制成10 mM储备液(现配现用)。
3. 标记反应:将蛋白质(如抗体)溶于标记缓冲液,按摩尔比(染料:蛋白质=5-10:1)加入染料储备液,混匀后室温避光反应1-2小时。
4. 纯化:使用凝胶过滤柱(如Sephadex G-25)或透析去除游离染料。
5. 验证:测定标记产物的荧光光谱和浓度(DOL计算),或通过SDS-PAGE荧光成像确认。
注意事项:反应需避光进行;染料储备液避免反复冻融;标记后产物应避光保存于4°C(短期)或-20°C(长期)。
储存条件
- 储存温度:-20°C避光干燥保存
- 稳定性:在建议条件下可稳定保存12个月
- 注意事项:避免暴露于潮湿、光照和高温环境;溶解后应分装保存,避免反复冻融;建议使用前短暂离心,确保粉末完全溶解。
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