磺酸基-Cy5.5-甲基 琥珀酰亚胺酯（远红外）Sulfo-Cy5.5-M SE (FIR)

概述

磺酸基-Cy5.5-甲基琥珀酰亚胺酯（Sulfo-Cy5.5 NHS ester）是一种水溶性远红外荧光染料活性酯衍生物，专用于生物分子标记。其核心为磺化Cy5.5荧光团，通过磺酸基团（-SO₃H）修饰增强水溶性，外观呈蓝色至深蓝色固体。该产品属于花青素类荧光染料，具有高荧光强度和低背景信号，适用于生物成像和检测。

理化性质

• 化学名称：磺酸基-Cy5.5-甲基琥珀酰亚胺酯
• CAS号：2419286-92-1
• 分子式：C₄₃H₄₇N₃O₁₆S₄（基于典型结构，实际以COA为准）
• 分子量：约1000.1 g/mol
• 外观：蓝色至深蓝色固体
• 溶解性：易溶于水、DMSO、DMF等极性溶剂
• 光谱特性：
• 激发波长（Ex）：~678 nm
• 发射波长（Em）：~695 nm
• 摩尔吸光系数：250,000 L·mol⁻¹·cm⁻¹
• 储存条件：-20°C避光干燥保存
• 稳定性：对光敏感，需避光保存；在弱碱性水溶液中反应活性高

应用领域

• 蛋白质/抗体标记：用于免疫荧光、Western blot、流式细胞术等。
• 肽和核酸标记：通过氨基修饰的寡核苷酸或肽的标记。
• 活体成像：远红外荧光适用于小动物活体成像，组织穿透深度大。
• 细胞成像：标记细胞表面蛋白或追踪细胞。
• FRET分析：作为供体或受体与其它荧光染料配对。
• 诊断试剂开发：用于侧向层析、生物传感器等。

实验方案建议

1. 标记反应通用流程

• 缓冲液：使用无氨基的缓冲液（如PBS、碳酸氢钠缓冲液），pH 7.5-8.5。避免使用Tris、甘氨酸等含氨基缓冲液。
• 染料储备液：用无水DMSO或DMF溶解Sulfo-Cy5.5 NHS ester至10 mg/mL，现配现用。
• 摩尔比：染料:蛋白质 = 5-10:1（优化范围3-20:1）。
• 反应：将染料缓慢加入蛋白质溶液，轻柔混匀，室温避光反应1-2小时。
• 纯化：使用透析、超滤或凝胶过滤色谱（如Sephadex G-25）去除游离染料。

2. 标记度（DOL）计算

• 测量标记蛋白在280 nm和678 nm的吸光度，使用公式：DOL = (A₆₇₈ × 稀释倍数) / (ε_dye × C_protein)，其中ε_dye为染料的摩尔吸光系数（250,000 L·mol⁻¹·cm⁻¹），C_protein为蛋白浓度（M）。注意校正染料在280 nm的吸光贡献（校正因子CF₂₈₀ ≈ 0.05）。

3. 注意事项

• 反应体系避免含有伯胺（如Tris）。
• 染料溶液避免反复冻融，分装保存。
• 标记后产物避光保存于4°C，尽快使用。
• 对于活细胞成像，需评估染料对细胞毒性。

储存条件

• 未开封产品：-20°C避光干燥保存，有效期24个月。
• 溶解后：用无水DMSO或DMF配制储备液，分装后-20°C避光保存，避免反复冻融，建议1个月内使用。
• 运输条件：室温避光运输，收到后立即按上述条件储存。
• 注意事项：避免接触水分和潮湿环境，防止NHS酯水解失活。

相关产品推荐

• Sulfo-Cy5 NHS ester（货号：PR01396）：近红外染料，Ex/Em ~646/662 nm。
• Sulfo-Cy7 NHS ester（货号：PR01398）：远红外染料，Ex/Em ~750/773 nm。
• Cy5.5 amine（货号：PR01395）：用于标记羧基或活化基团。
• Sulfo-Cy3 NHS ester（货号：PR01394）：可见光区染料，Ex/Em ~548/563 nm。
• BSA标准品（货号：PR10001）：用于标记效率验证。
• PD-10脱盐柱（货号：PR20001）：用于染料标记后的纯化。