Cy5.5-甲基 琥珀酰亚胺酯（远红外）Cy5.5-M SE (FIR)

概述

Cy5.5-甲基琥珀酰亚胺酯（Cy5.5-M SE）是一种基于Cy5.5远红外荧光染料的活性衍生物，专为生物分子标记设计。其核心为Cy5.5荧光团，末端带有琥珀酰亚胺酯（SE）官能团，可在温和条件下与蛋白质、肽链及其他含伯氨基（-NH2）的分子形成稳定的共价酰胺键。该产品激发波长约为675-680 nm，发射波长约为695-700 nm，具有组织穿透深、背景荧光低等优点，适用于体外和体内荧光成像。

理化性质

• 外观：深蓝色至蓝紫色固体粉末
• 分子式：C₄₁H₄₄N₃O₄·（可能含反离子）
• 分子量：约 642.8 g/mol（游离碱）
• 溶解性：易溶于二甲基亚砜（DMSO）、二甲基甲酰胺（DMF）等极性有机溶剂，微溶于水（建议先用有机溶剂溶解后稀释至水相）
• 激发波长（λ_ex）：675-680 nm
• 发射波长（λ_em）：695-700 nm
• 摩尔消光系数：约 250,000 M^-1cm^-1（在甲醇中）
• 荧光量子产率：约 0.2-0.3（取决于环境）
• 储存条件：-20°C 避光干燥保存，避免反复冻融
• 稳定性：对光敏感，在潮湿环境中易水解，需严格避光防潮

应用领域

• 蛋白质标记：用于抗体、酶、多肽等含伯氨基的生物分子共价标记，适用于Western blot、免疫荧光、流式细胞术等。
• 体内成像：利用远红外荧光穿透性好的特点，用于小动物活体成像，追踪标记分子在体内的分布和代谢。
• 细胞标记：标记细胞表面蛋白或内部蛋白，用于细胞追踪和功能研究。
• 核酸标记：通过氨基修饰的寡核苷酸进行标记，用于FISH、微阵列等。
• 药物递送研究：标记纳米颗粒、脂质体等递送载体，评估其靶向性和生物分布。
• 多色荧光成像：与可见光区荧光染料（如FITC、Cy3）组合，实现多通道检测。

实验方案建议

1. 标记反应通用流程（以蛋白质为例）

• 缓冲液准备：使用不含伯氨基的缓冲液（如PBS、碳酸氢钠缓冲液，pH 8.0-8.5）。避免使用Tris、甘氨酸等含氨基缓冲液。
• 染料溶解：将Cy5.5-M SE溶于无水DMSO，配制成10 mM储备液（现配现用）。
• 蛋白质准备：将目标蛋白溶解于上述缓冲液，浓度建议≥2 mg/mL。
• 标记反应：按染料与蛋白质摩尔比（通常5-10:1）将染料溶液缓慢加入蛋白质溶液中，轻轻混匀，室温避光反应1-2小时。
• 纯化：使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或透析去除游离染料。
• 验证：通过紫外-可见分光光度法测定标记度（DOF），或通过SDS-PAGE荧光成像确认。

2. 关键注意事项

• pH控制：反应pH应保持在8.0-8.5，以确保氨基去质子化，提高标记效率。
• 避光操作：整个反应和储存过程需避光，防止荧光淬灭。
• 染料与蛋白比例优化：过度标记可能导致蛋白聚集或荧光自淬灭，建议通过预实验确定最佳比例。
• 纯化后保存：标记产物应分装避光保存于-20°C，避免反复冻融。

3. 常见问题排查

• 标记效率低：检查pH是否正确、染料是否水解（DMSO储备液应现配）、蛋白浓度是否足够。
• 荧光背景高：确保游离染料去除彻底，纯化步骤充分。
• 蛋白聚集：降低标记比例或使用新鲜染料。

储存条件

• 未开封产品：-20°C 避光干燥保存，有效期见标签。
• 溶解后：DMSO储备液应分装避光保存于-20°C（建议-80°C长期保存），避免反复冻融，建议1个月内使用。
• 使用中：避免暴露于强光和潮湿环境，操作时置于冰上。
• 运输条件：室温运输，但收到后应立即按上述条件储存。

相关产品推荐

• Cy5.5-NHS酯（非甲基化）：类似产品，可能具有不同的溶解性或标记特性。
• Cy5.5-马来酰亚胺：用于巯基（-SH）标记，与琥珀酰亚胺酯（氨基标记）互补。
• Cy5.5-叠氮化物：用于点击化学标记。
• 其他远红外染料：如Cy7、IRDye 800CW等，适用于不同波长需求。
• 标记试剂盒：包含纯化柱和缓冲液的完整标记试剂盒，简化实验流程。
• 荧光淬灭剂：如BHQ-3，用于FRET实验。