磺化Cy7-伯胺Sulfo-Cyanine 7 amine

概述

磺化Cy7-伯胺（Sulfo-Cy7-amine，货号PC21437，CAS号2236573-39-8）是一种基于七甲川花菁染料骨架的高水溶性近红外荧光染料。其分子两端分别引入了磺酸基（-SO₃⁻）和伯胺基（-NH₂），磺酸基显著提升了水溶性，使其极易溶于水，而伯胺基提供了高活性的生物偶联位点，可与羧基、活化酯等发生反应。该染料激发波长约为748 nm，发射波长约为774 nm，处于近红外窗口I，适用于深层组织成像。磺化Cy7-伯胺具有优异的光稳定性，适合长时间活体成像追踪，广泛应用于生物医学成像领域。

理化性质

• 外观：深绿色固体
• 分子式：C₄₃H₅₈N₄O₇S₂（基于典型结构，实际以COA为准）
• 分子量：约815.07 g/mol
• 溶解性：易溶于水、甲醇、DMF等极性溶剂；极易溶于水
• 荧光光谱：激发波长（Ex）~748 nm，发射波长（Em）~774 nm（在PBS中）
• 摩尔消光系数：~240,000 L·mol⁻¹·cm⁻¹（典型值）
• 荧光量子产率：~0.1（在水中）
• 储存条件：避光、干燥、-20℃保存
• 稳定性：对光和湿度敏感，需避光防潮；水溶液建议现配现用，避免长时间放置

应用领域

• 生物分子标记：用于标记蛋白质、抗体、核酸等含羧基或活化酯的分子，通过伯胺与羧基的缩合反应形成稳定酰胺键。
• 活体成像：适用于小动物活体荧光成像，近红外荧光穿透深度大，背景自发荧光低，可实现深层组织高灵敏度成像。
• 细胞追踪：标记细胞膜或细胞内成分，用于细胞迁移、增殖和分化研究。
• 药物递送研究：标记药物载体或药物分子，追踪其在体内的分布和代谢。
• 流式细胞术：作为近红外荧光探针，用于多色流式分析。
• 荧光显微镜：适用于组织切片和活细胞近红外荧光成像。

实验方案建议

1. 标记羧基化生物分子（如蛋白质、抗体）

推荐使用EDC/NHS活化法：

• 将目标分子（含羧基）溶解于适当缓冲液（如MES缓冲液，pH 5.5-6.5）。
• 加入EDC（终浓度约2 mM）和NHS（终浓度约5 mM），室温反应15-30分钟以活化羧基。
• 将磺化Cy7-伯胺溶解于无水DMSO或DMF（母液浓度通常为10 mM），加入活化后的反应体系中（染料与蛋白摩尔比建议1:1至10:1），避光反应2-4小时（室温）或过夜（4℃）。
• 反应结束后，通过透析、超滤或凝胶过滤色谱（如Sephadex G-25）纯化标记产物，去除游离染料。

2. 标记含活化酯的分子

• 若目标分子已带有NHS酯等活化基团，可直接与磺化Cy7-伯胺反应。
• 将染料溶于无水DMSO（母液浓度10 mM），加入目标分子溶液（缓冲液pH 7.5-8.5，避免含伯胺的缓冲液如Tris），摩尔比建议1:1至5:1。
• 避光反应1-2小时（室温），纯化同上。

3. 活体成像实验

• 将标记好的探针通过尾静脉注射（剂量根据动物体重和探针浓度优化，通常每只小鼠注射10-50 nmol染料当量）。
• 使用近红外成像系统（激发滤光片740-750 nm，发射滤光片770-790 nm）进行成像，建议在注射后不同时间点（如1、4、8、24小时）采集图像。
• 注意避光操作，减少光漂白。

4. 细胞标记

• 将磺化Cy7-伯胺溶于无血清培养基或PBS（浓度1-10 μM），与细胞孵育15-30分钟（37℃）。
• 用PBS洗涤细胞3次，去除未结合的染料，然后进行流式分析或荧光显微镜观察。

注意事项

• 反应体系避免使用含伯胺的缓冲液（如Tris、甘氨酸），以免竞争反应。
• 染料母液建议用无水DMSO配制，分装避光保存于-20℃，避免反复冻融。
• 标记反应需避光进行，纯化后产物应避光保存。

储存条件

• 储存温度：-20℃避光干燥保存
• 储存形式：固体粉末或无水DMSO/DMF母液（母液建议分装，-20℃避光保存，避免反复冻融）
• 稳定性：在推荐条件下可稳定保存12个月；水溶液不稳定，建议现配现用
• 注意事项：避免暴露于强光、潮湿和高温环境；取用时需平衡至室温后再打开瓶盖，防止吸潮

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