CY7-羧基Cy7

概述

CY7-羧基（货号：PC22664，CAS号：2241083-63-4）是一种含有羧基官能团的近红外荧光染料，属于花菁染料系列。其最大激发波长约为750 nm，最大发射波长约为773 nm，适用于生物标记和成像。羧基可用于与氨基反应形成稳定的酰胺键，实现与蛋白质、抗体、多肽等生物分子的共价偶联。

理化性质

• 外观：深绿色至蓝色固体粉末
• 分子式：C37H43N2NaO8S2（基于典型结构，具体以实际为准）
• 分子量：约722.9 g/mol
• 溶解性：易溶于水、DMSO、DMF等极性溶剂
• 最大激发波长（λex）：750 nm（水中）
• 最大发射波长（λem）：773 nm（水中）
• 消光系数：约250,000 M⁻¹cm⁻¹
• 荧光量子产率：约0.3（水中）
• 储存条件：-20°C避光干燥保存
• 稳定性：对光敏感，应避免长时间光照；在酸性条件下稳定，碱性条件下可能发生降解

应用领域

• 生物标记：用于标记蛋白质、抗体、多肽等，进行Western blot、免疫荧光等检测。
• 活体成像：近红外荧光适用于小动物活体成像，具有较深的组织穿透性。
• 流式细胞术：可作为近红外通道的荧光探针。
• 药物递送研究：标记纳米颗粒或药物载体，追踪其在体内的分布。
• 分子探针构建：通过羧基与氨基反应，将CY7偶联到靶向分子上，构建近红外荧光探针。

实验方案建议

1. 溶液配制

• 建议使用无水DMSO或DMF配制CY7-羧基储备液（例如10 mM），避免使用含氨基的缓冲液（如Tris），以防自身交联。
• 储备液应分装后-20°C避光保存，避免反复冻融。

2. 偶联反应（以标记蛋白质为例）

• 缓冲液：使用不含氨基的缓冲液（如PBS或碳酸盐缓冲液，pH 8.0-8.5）。
• 活化：通常需使用EDC和NHS（或sulfo-NHS）活化羧基，形成活性酯。
• 推荐摩尔比：CY7-羧基:EDC:NHS = 1:1.5:2（可根据实验优化）。
• 活化时间：室温反应15-30分钟。
• 偶联：将活化后的CY7加入蛋白质溶液（蛋白质浓度建议≥1 mg/mL），摩尔比（染料:蛋白质）通常为2-10:1，室温反应1-2小时或4°C过夜。
• 纯化：使用透析、超滤或凝胶过滤色谱（如Sephadex G-25）去除游离染料。

3. 标记度（DOL）测定

• 使用紫外-可见分光光度计测定偶联物在750 nm处的吸光度，并根据蛋白质浓度计算DOL。
• 公式：DOL = (A750 × ε蛋白) / (A280 × ε染料 × 校正因子)
• 其中ε染料为染料的消光系数，ε蛋白为蛋白质的消光系数。

4. 荧光检测

• 激发波长：750 nm，发射波长：773 nm。
• 注意设置合适的滤光片，避免交叉干扰。

5. 注意事项

• 反应体系避免含有伯胺（如Tris、甘氨酸），以免竞争反应。
• 染料对光敏感，操作时尽量避光。
• 活化后的活性酯易水解，应现配现用。

储存条件

• 粉末：-20°C避光干燥保存，有效期2年。
• 溶液：-20°C避光保存，建议分装，避免反复冻融，有效期6个月。
• 运输条件：室温运输，避光防潮。
• 注意事项：避免接触强光、高温和潮湿环境；避免与强氧化剂共存。

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