细胞核远红荧光染色试剂盒(Nuclear Far-red 5),即Cell Nuclear Far-red Fluorescence Staining Kit with Nuclear Far-red 5 (也称DRAQ5),是一种快速、高效、便捷的基于Nuclear Far-red 5特异地对活细胞或固定后的细胞或组织样品的细胞核进行染色的试剂盒。本试剂盒染色后可用于荧光显微镜或流式细胞仪等的荧光检测。
Nuclear Far-red 5是一种远红外蒽醌染料,具有高亲和力的双链DNA结合特性。该染料可透过细胞膜,适用于活细胞或固定后/死细胞的细胞核染色。其分子式为C22H28N4O4,分子量412.49,CAS号为254098-36-7。该染料的最大激发光波长为647nm,最大发射光波长为697nm [1]。在荧光显微成像中,推荐使用633nm或647nm激发光源。在流式细胞分析中,若使用488nm激发,可选用PE-Cy5专用滤光片进行检测;若使用633nm激发,建议配合APC滤光片进行检测。在细胞周期/DNA分析中,为优化G1与G2/M峰的变异系数(CV),推荐使用波长较长的滤光片,例如710LP或PE-Cy7专用滤光组合。使用前请确保仪器能够在此波长范围内进行检测。
由于Nuclear Far-red 5的激发和发射光谱较宽,容易与其它远红光染料的信号发生重叠,不建议将其与可被488或633nm激光激发的远红光染料联用,包括PE-Cy7、APC、AF647、AF700以及APC-AF750、APC-Cy7等类似产品。
Nuclear Far-red 5与Hoechst 33342类似,可直接穿透细胞膜,适用于活细胞研究。然而,Hoechst 33342的吸收光谱位于紫外波段,使用紫外光激发可能诱导细胞损伤。相比之下,Nuclear Far-red 5的激发与发射峰主要在647nm和697nm附近,因此无需担心因紫外激发引起的细胞损伤,非常适合活细胞核染色后续需要持续培养和观察的实验。
本试剂盒提供了用于稀释Nuclear Far-red 5 (1000X)的检测缓冲液(Assay Buffer),该检测缓冲液可以极大程度地保证细胞活力和接近正常的生长状态。
对于组织切片,按照每个组织需要50μl染色液计算,本试剂盒小包装和中包装分别可以检测200和1000个组织切片样品。对于细胞样品,按照96孔板中的样品每孔使用100μl染色液计算,本试剂盒小包装和中包装分别可以检测100和500个样品;按照6孔板中的样品每孔使用1ml染色液计算,本试剂盒小包装和中包装分别可以检测10和50个样品。
Nuclear Far-red 5具有DNA特异性,能够对DNA含量进行定量分析,适合用于细胞周期分析。此外,Nuclear Far-red 5能对活细胞及固定细胞中的双链DNA/细胞核进行快速染色,且无需RNase处理或洗涤步骤。它与GFP、FITC等多种荧光标记兼容,是进行多重荧光分析的理想探针。Nuclear Far-red 5可在较宽的激发波长范围内(如488、514、568、633或647nm)使用,虽在488nm激发时并非最优条件,但其高亲和力的DNA结合特性使其在488nm激发下仍能有效与GFP/FITC和PE信号区分,无需进行荧光补偿,且扫描时间通常仅为Hoechst/DAPI的一半。