MitoSOX RedMitoSOX Red

目录号: PC22605 纯度: 99.11%
MitoSOX Red 属于荧光染料,是一种靶向线粒体超氧化物的荧光探针,具有细胞膜渗透性和特异性,被氧化的 MitoSOX Red 随后与线粒体/细胞核内的核酸结合,产生强红色荧光。用于检测活细胞线粒体超氧化物。
MitoSOX Red(CAS 1003197-00-9)产品图
CAS No. :1003197-00-9
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PC22605-500μg 500μg ¥1975.00 请登录
PC22605-1mg 1mg ¥3085.00 请登录
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中文名称
MitoSOX Red
英文名称
MitoSOX Red
英文别名
Mito-hydroethidine;Mito-HE;MitoSOX Red;EX-A6665;GLXC-25700;1003197-00-9;6-(3,8-diamino-6-phenyl-6H-phenanthridin-5-yl)hexyl-triphenylphosphanium;iodide;G91408
Cas No.
1003197-00-9
分子式
C43H43In3P
分子量
759.70
详情描述

MitoSOX Red 属于荧光染料,是一种靶向线粒体超氧化物的荧光探针,具有细胞膜渗透性和特异性,被氧化的 MitoSOX Red 随后与线粒体/细胞核内的核酸结合,产生强红色荧光。用于检测活细胞线粒体超氧化物。

搜索质检报告(COA)

Does hemoglobin affect measures of mitochondrial respiration in red blood cells? Comment to “Increased retention of functional mitochondria in mature sickle red blood cells is associated with increased sickling tendency, hemolysis and oxidative stress”

Haematologica 2024. DOI: 10.3324/haematol.2024.286135 相关性评分:50

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Presentation

Revista de Educación a Distancia (RED) 2021. DOI: 10.6018/red.462271 相关性评分:50

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1:一般建议:溶解度为Medlife测试数据,可能与文献描述存在差异。这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。为了使其更好的溶解,请用37℃加热试管并在超声波水浴中震动片刻。不同批次产品溶解度各有差异,仅做参考,具体以实验方案为准。

2:储存条件:粉末-20°C一般情况可以保存3年,溶于溶剂-80°C一般情况可以保存1年。不同产品及不同批次产品可能存在差异,请细致阅读产品信息,并辅助参考相关文献描述。

概述

MitoSOX Red(货号:PC22605,CAS号:1003197-00-9)是一种靶向线粒体超氧化物的荧光探针,具有细胞膜渗透性和特异性。该探针本身呈弱荧光,进入活细胞后选择性积累于线粒体,并被线粒体中的超氧化物氧化,氧化产物随后与线粒体/细胞核内的核酸结合,产生强红色荧光。MitoSOX Red 广泛用于检测活细胞中的线粒体超氧化物水平,是研究氧化应激、线粒体功能和细胞凋亡等过程的重要工具。

理化性质

  • 化学名称:MitoSOX Red(具体化学名可能因供应商而异,通常为3,8-二氨基-5-(6-三苯基膦基己基)-6-苯基菲啶鎓,碘化物)
  • CAS号:1003197-00-9
  • 分子式:C<sub>43</sub>H<sub>40</sub>I<sub>3</sub>N<sub>5</sub>P(以碘化物盐形式)
  • 分子量:约1046.5 g/mol(以碘化物盐计)
  • 外观:红色至深红色固体
  • 溶解性:可溶于DMSO、DMF等有机溶剂,微溶于水
  • 荧光特性:氧化产物与核酸结合后,激发波长(Ex)约510 nm,发射波长(Em)约580 nm(红色荧光)
  • 储存条件:避光、干燥、-20°C保存
  • 稳定性:对光和空气敏感,需避光保存,避免反复冻融

应用领域

  • 线粒体超氧化物检测:特异性检测活细胞线粒体中的超氧化物水平,用于评估氧化应激。
  • 氧化应激研究:研究药物、环境因素或病理条件引起的线粒体ROS产生。
  • 线粒体功能与功能障碍:评估线粒体呼吸链功能、解偶联剂效果等。
  • 细胞凋亡与自噬:监测与线粒体相关的细胞死亡过程中的超氧化物产生。
  • 神经生物学:研究神经退行性疾病中的线粒体氧化损伤。
  • 心血管研究:评估心肌细胞缺血再灌注损伤中的ROS产生。
  • 高通量筛选:用于筛选影响线粒体ROS的化合物。

实验方案建议

1. 试剂准备

  • 储存液配制:将MitoSOX Red溶于高质量无水DMSO中,配制成5 mM储存液。分装后避光保存于-20°C,避免反复冻融。
  • 工作液配制:使用前将储存液用适宜缓冲液(如HBSS或细胞培养基)稀释至终浓度1-5 μM。建议现配现用,避光操作。

2. 细胞染色步骤(以贴壁细胞为例)

  • 将细胞培养于合适的培养皿或玻底培养板中,至所需汇合度。
  • 吸除培养基,用预温的HBSS或PBS轻轻洗涤细胞1-2次。
  • 加入含1-5 μM MitoSOX Red工作液的培养基或缓冲液,确保覆盖细胞。
  • 在37°C、5% CO<sub>2</sub>培养箱中避光孵育10-30分钟(具体时间需根据细胞类型优化)。
  • 吸除染色液,用预温的HBSS或PBS洗涤细胞2-3次,去除未结合的探针。
  • 加入预温的培养基或缓冲液,立即进行荧光显微镜或流式细胞术检测。

3. 检测条件

  • 荧光显微镜:使用红色荧光滤光片(Ex ~510 nm, Em ~580 nm)。
  • 流式细胞术:使用FL2或FL3通道(Ex ~488 nm, Em ~585 nm)。
  • 荧光酶标仪:Ex ~510 nm, Em ~580 nm。

4. 对照设置

  • 阳性对照:使用抗霉素A(Antimycin A)或鱼藤酮(Rotenone)处理细胞以诱导线粒体超氧化物产生。
  • 阴性对照:未染色细胞或使用线粒体电子传递链抑制剂(如CCCP)预处理。
  • 背景对照:仅用缓冲液处理的细胞。

5. 注意事项

  • 探针需避光操作,避免光照导致荧光淬灭。
  • 染色浓度和孵育时间需根据细胞类型和实验目的优化,避免过染导致非特异性信号。
  • 洗涤步骤需充分,以减少背景荧光。
  • 建议使用无酚红培养基或HBSS,以减少背景荧光干扰。
  • 探针氧化产物与核酸结合后荧光增强,因此固定或透化细胞可能导致荧光信号改变,建议活细胞检测。
  • 本产品仅用于科研,不可用于临床诊断。

储存条件

  • 储存温度:-20°C避光干燥保存。
  • 储存液:溶于DMSO的储存液应分装后于-20°C避光保存,避免反复冻融,建议6个月内使用。
  • 有效期:在建议条件下保存,自收到之日起12个月内有效。
  • 运输条件:室温运输,收到后立即按上述条件储存。
  • 注意事项:避免暴露于强光、潮湿和高温环境。

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  • JC-1:线粒体膜电位检测试剂盒,评估线粒体健康状态。
  • Antimycin A:线粒体电子传递链抑制剂,常用作阳性对照诱导超氧化物产生。
  • Rotenone:线粒体复合物I抑制剂,用于诱导氧化应激。
Q1:MitoSOX Red 检测线粒体超氧化物的原理是什么?为什么氧化后荧光会增强?

MitoSOX Red 本身呈弱荧光,可透过细胞膜并选择性积累于线粒体。在线粒体内被超氧化物氧化后,氧化产物与线粒体/细胞核内的核酸结合,产生强红色荧光(Ex ~510 nm,Em ~580 nm)。荧光增强源于氧化产物与核酸结合后的构象变化,使其荧光量子产率显著提高。因此,荧光强度可反映线粒体超氧化物水平,但需注意固定或透化细胞可能改变荧光信号,建议活细胞检测。

Q2:MitoSOX Red 用什么溶剂配制储存液?可以用水或缓冲液直接溶解吗?

建议使用高质量无水 DMSO 配制储存液,避免使用水或缓冲液直接溶解。因为 MitoSOX Red 微溶于水,直接用水溶解可能导致探针无法完全溶解或聚集,影响染色效果。通常配制成 5 mM 储存液,分装后避光保存于 -20°C。工作液使用时用 HBSS 或细胞培养基稀释至 1-5 μM,现配现用并避光操作。具体溶解方法可参考产品说明书或联系技术支持。

Q3:MitoSOX Red 的 DMSO 储存液在 -20°C 能保存多久?反复冻融会影响实验结果吗?

根据产品资料,DMSO 储存液分装后于 -20°C 避光保存,建议 6 个月内使用。反复冻融会加速探针降解,导致背景升高或信号减弱,因此应避免。建议将储存液分装成单次使用的小份,每次取一管,用后立即放回 -20°C。若储存液出现颜色变深或沉淀,应停止使用。具体有效期可查看产品 COA 或说明书,如有疑问请联系技术支持。

Q4:如何确认 MitoSOX Red 的纯度和批次质量?有提供 COA 或质检报告吗?

MitoSOX Red 的纯度与批次质量可通过产品 COA(质检报告)确认,其中通常包含外观、溶解性、荧光性能等指标。建议收到产品后核对 COA 上的批号与实物是否一致,并检查外观是否为红色至深红色固体。若对特定批次有疑问,可联系技术支持获取更多质检信息。本产品仅用于科研,不可用于临床诊断。

Q5:用 MitoSOX Red 染色活细胞时,工作液浓度和孵育时间如何选择?

推荐工作液终浓度为 1-5 μM,在 37°C、5% CO2 培养箱中避光孵育 10-30 分钟。具体浓度和时间需根据细胞类型和实验目的优化,避免过染导致非特异性信号。建议先进行预实验,设置不同浓度和时间梯度,以信噪比和细胞状态为指标选择最佳条件。染色后需用预温的 HBSS 或 PBS 充分洗涤 2-3 次,以减少背景荧光。详细方案可参考产品说明书。

Q6:MitoSOX Red 染色后可以用甲醛固定或透化细胞吗?会不会影响荧光信号?

不建议对 MitoSOX Red 染色的细胞进行固定或透化。因为探针氧化产物与核酸结合后产生荧光,固定或透化可能改变细胞膜通透性和核酸结合状态,导致荧光信号减弱或重分布。产品资料建议活细胞检测,以获得更可靠的线粒体超氧化物信号。若实验必须固定,建议先进行预实验比较固定前后的信号变化,或联系技术支持获取建议。

Q7:MitoSOX Red 运输条件是什么?收到后如何正确处理和储存?

MitoSOX Red 通常采用室温运输,收到后应立即按 -20°C 避光干燥条件储存。运输过程中短暂室温暴露一般不影响产品性能,但应避免长时间暴露于强光、潮湿或高温环境。操作时建议佩戴手套和护目镜,避免吸入或接触皮肤。本产品仅用于科研,不可用于临床诊断。具体安全信息可查阅 SDS 或联系技术支持。

Q8:MitoSOX Red 能否用于流式细胞术检测?激发和发射波长如何设置?

可以。MitoSOX Red 氧化产物与核酸结合后,激发波长约 510 nm,发射波长约 580 nm,适用于流式细胞术的 FL2 或 FL3 通道(Ex ~488 nm,Em ~585 nm)。建议使用未染色细胞作为阴性对照,并设置阳性对照(如抗霉素 A 或鱼藤酮处理)以验证信号特异性。染色后充分洗涤,避免探针残留增加背景。具体检测条件需根据仪器型号和细胞类型优化,可参考相关文献或联系技术支持。

参考文献

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The molarity calculator equation
Mass (g) = Concentration (mol/L) × Volume (L) × Molecular Weight (g/mol)
The dilution calculator equation
Concentration (start) × Volume (start) = Concentration (final) × Volume (final)
This equation is commonly abbreviated as: C1V1 = C2V2