线粒体深红色荧光染色试剂盒(Mito-Tracker Deep Red FM),即Mitochondrial Deep Red Fluorescence Staining Kit with Mito-Tracker Deep Red FM,是基于线粒体深红色荧光探针Mito-Tracker Deep Red FM用于活细胞线粒体特异性荧光染色的试剂盒。本试剂盒适用于荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等荧光检测设备。本试剂盒不能用于固定细胞的染色,但本试剂盒染色后可以进行固定。
Mito-Tracker Deep Red FM (线粒体深红荧光探针),是一种具有细胞通透性、能够特异性地标记细胞中具有生物活性的线粒体,并检测线粒体膜电位的线粒体深红荧光探针。本产品为高纯度探针,可以兼容后续的细胞固定和通透,但染色后再固定和通透,荧光强度会有一定的下降。
本产品是一种深红荧光染料,只需简单地和细胞孵育,即可通过被动运输穿过细胞膜,并借助本探针含有的弱巯基反应性的氯甲基(mildly thiol-reactive chloromethyl)官能团特异性地标记有生物活性的线粒体。本探针含有的弱巯基反应性的氯甲基,可以和线粒体内蛋白的巯基反应并共价连接,因此后续实验使用多聚甲醛或甲醛等醛类固定剂,以及细胞通透的去垢剂Triton X-100等处理时,线粒体的荧光标记不会消失,但可能会有一定程度的下降(约下降2-8倍)。由于本荧光探针的激发光谱和发射光谱与常见的绿色和红色荧光探针通常不会重叠,因此非常适合用于多重荧光染色实验。
Mito-Tracker Deep Red FM可以用作线粒体特异性的荧光探针。和Rhodamine 123或JC-1相似,Mito-Tracker Deep Red FM对于线粒体的染色依赖于线粒体膜电位,因此该探针只能对活的细胞或组织进行染色,不能对固定或通透后的细胞或组织进行染色。
Mito-Tracker Deep Red FM分子式为C34H36Cl2N2,分子量为543.58,Mito-Tracker Deep Red FM为深红荧光探针,最大激发波长为644nm,最大发射波长为665nm。
由于Mito-Tracker Deep Red FM在线粒体内的聚集依赖于线粒体的膜电位,因此本产品也可以作为线粒体膜电位的指示探针,并可以通过检测线粒体膜电位的变化来检测细胞凋亡。
对于96孔板中的样品,按照每孔使用100μl染色液计算,本试剂盒的小包装和中包装可以进行500次和2000次检测;如果用于流式细胞仪检测,按照每个样品的检测体系体积为0.5ml时,本试剂盒的小包装和中包装可以进行100次和400次检测;对于6孔板中的贴壁培养细胞样品,按照每孔使用1ml染色液计算,本试剂盒的小包装和中包装可以进行50次和200次检测。