MitoBright 线粒体荧光探针（绿色）MitoBright Mitochondrial Fluorescent Probes (Green )

概述

MitoBright 线粒体荧光探针（绿色）是一种具有细胞膜透性的线粒体绿色荧光染料，可在纳摩尔水平对线粒体进行特异性染色。该染料在线粒体膜上积累并呈现明亮的绿色荧光，其定位不依赖于线粒体膜电位。独特的弱硫醇反应性氯甲基基团可与线粒体组分共价结合，使得染料在细胞固定和透化后仍能部分保留，但信噪比不理想。与罗丹明123等膜电位依赖性探针相比，MitoBright在需要醛类固定或研究线粒体能量状态影响的实验中具有明显优势。然而，该探针更适合活细胞染色，固定后荧光信号会减弱或丢失。

理化性质

• CAS号：201860-17-5
• 外观：通常为固体粉末或溶于有机溶剂（如DMSO）的溶液
• 溶解性：易溶于DMSO、DMF等有机溶剂，微溶于水
• 荧光特性：激发波长（Ex）~490 nm，发射波长（Em）~516 nm（绿色荧光）
• 细胞膜透性：具有，可被动扩散进入细胞
• 工作浓度：推荐使用纳摩尔级别（如100-500 nM）
• 稳定性：避光、干燥、低温条件下稳定

应用领域

• 活细胞线粒体成像：适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、高内涵成像等平台，可视化线粒体形态和分布。
• 线粒体功能研究：用于评估线粒体质量、线粒体膜电位（非依赖性）以及线粒体在细胞应激、凋亡等过程中的变化。
• 多色荧光实验：绿色荧光可与红色或远红色线粒体探针、其他细胞器探针或免疫荧光标记结合，进行多通道成像。
• 药物筛选与毒性评估：通过监测线粒体形态和数量的变化，评估化合物对线粒体的影响。
• 固定细胞实验：在需要醛类固定的实验中，MitoBright可提供比膜电位依赖性探针更稳定的信号，但需注意优化固定条件。

实验方案建议

1. 储备液配制

• 将产品溶于高质量无水DMSO，配制成1 mM储备液，分装后-20°C避光保存，避免反复冻融。

2. 工作液配制

• 使用无血清培养基或Hanks'平衡盐溶液（HBSS）稀释储备液至100-500 nM的工作浓度。建议首次实验进行浓度梯度优化（如50 nM、100 nM、200 nM、500 nM）。

3. 活细胞染色步骤

• 将细胞接种于合适的培养皿或玻底小皿中，培养至所需密度（通常50-70%汇合度）。
• 吸弃培养基，用预温的HBSS或培养基轻轻洗涤细胞一次。
• 加入含MitoBright工作液的培养基，在37°C、5% CO2条件下孵育15-30分钟。
• 吸弃染色液，用预温的HBSS或培养基洗涤细胞2-3次。
• 加入新鲜培养基，立即进行荧光显微镜观察（Ex/Em ~490/516 nm）。

4. 固定细胞实验建议

• 若需固定，推荐使用4%多聚甲醛室温固定10-15分钟，随后用PBS洗涤。注意：固定可能导致荧光信号减弱，建议固定后尽快观察，并设置未固定对照。
• 透化步骤（如0.1% Triton X-100）可能进一步降低信号，需谨慎优化。

5. 注意事项

• 染色过程中避免血清干扰，建议使用无血清培养基或HBSS稀释染料。
• 孵育时间可根据细胞类型和实验需求调整（通常15-30分钟）。
• 荧光观察时使用合适的滤光片组（如FITC通道）。
• 为减少光漂白，建议降低激发光强度并缩短曝光时间。
• 本产品仅限科研使用。

储存条件

• 粉末形式：避光、干燥、-20°C保存，有效期通常为2年。
• 储备液（DMSO）：分装后-20°C避光保存，避免反复冻融，建议6个月内使用。
• 运输条件：室温运输，收到后立即按上述条件储存。

相关产品推荐

• MitoTracker Red CMXRos（货号：待定）：红色荧光线粒体探针，膜电位依赖性，适用于固定细胞。
• JC-1线粒体膜电位检测试剂盒（货号：待定）：用于检测线粒体膜电位变化。
• Hoechst 33342（货号：待定）：蓝色荧光核染料，用于细胞核复染。
• LysoTracker Green DND-26（货号：待定）：绿色荧光溶酶体探针，用于多色成像。
• Fluo-4 AM（货号：待定）：钙离子荧光探针，用于细胞内钙信号检测。