Mito-Tracker Red CMXRos染色液(1000X) ( Mito-Tracker Red CMXRos Staining Solution, 1000X),是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等的活细胞线粒体染色和线粒体膜电位检测的溶液。仅需染色10分钟就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的活细胞线粒体红色荧光染色。
Mito-Tracker Red CMXRos (线粒体红色荧光探针),也称MitoTracker Red CMXRos,是一种具有细胞通透性的X-rosamine衍生物(Chloromethyl-X-rosamine,简称CMXRos),能够特异性地标记细胞中具有生物活性的线粒体,检测线粒体膜电位。本产品为高纯度探针,兼容后续的细胞固定和通透,但染色后再固定和通透,荧光强度会有一定程度的下降。
本产品是一种氧化型的红色荧光染料,只需简单地和细胞孵育,即可通过被动运输穿过细胞膜,并借助本探针含有的弱巯基反应性的氯甲基(Mildly thiol-reactive chloromethyl)官能团特异性地标记有生物活性的线粒体。本探针含有的弱巯基反应性的氯甲基,可以和线粒体内蛋白的巯基反应并共价连接,因此后续实验使用多聚甲醛或甲醛等醛类固定剂,以及细胞通透的去垢剂Triton X-100等处理时,线粒体的荧光标记不会消失,但可能会有一定程度的下降(约下降2-10倍)。由于本荧光探针的激发光谱和发射光谱与常见的绿色荧光探针重叠较少,因此非常适合用于荧光双标实验。
Mito-Tracker Red CMXRos分子式为C32H32Cl2N2O,分子量为531.5,CAS number为167095-09-2,Mito-Tracker Red CMXRos呈红色荧光,最大激发波长为579nm,最大发射波长为599nm。
Mito-Tracker Red CMXRos可以用作线粒体特异性的荧光探针。和Rhodamine 123或JC-1相似,Mito-Tracker Red CMXRos对于线粒体的染色依赖于线粒体膜电位,因此该探针只能对活的细胞或组织进行染色,不能对固定或通透后的细胞或组织进行染色。
本产品适用范围广。本产品可用于各种方法培养出的3D细胞球或类器官,包括超低吸附细胞培养板、Matrix-Gel™基质胶或Matrigel包被的平板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。
本产品使用便捷,整个检测过程仅需约10-30分钟即可完成。对于常规的3D细胞活细胞染色,仅需加入本产品避光孵育10分钟即可进行荧光检测。
由于Mito-Tracker Red CMXRos在线粒体内的聚集依赖于线粒体的膜电位,因此本产品也可以作为线粒体膜电位的指示探针,通过检测线粒体膜电位的变化来检测细胞凋亡。
传统的细胞培养大多以二维(Two-dimensional, 2D)的形式展开,但2D培养的细胞在生长方式、生长形态、分化和功能等方面都与体内生理条件下细胞的真实形态和结构存在明显差异,可能会因为细胞结构和组织形态的缺失,使实验结果的可信度降低。三维(Three-dimensional, 3D)细胞培养能够更好地模拟体内细胞生存的微环境,更能代表体内组织,也能更真实的反映细胞与细胞间、细胞与基质间的相互作用,细胞对外源性和内源性刺激的应答也更接近于它们在体内的反应,3D细胞培养从而成为更有价值并更为可信的体外实验模型,能够获得与体内实验更加一致的实验结果。
3D肿瘤细胞模型越来越多地被用于了解疾病机制和药物研发。2D培养的肿瘤细胞,其单侧细胞膜可以均匀地获得营养和氧气,而3D培养的肿瘤细胞团的内部细胞获得营养和氧气的机会更少,形成自然的营养和氧气梯度,能更好地模拟体内微环境条件,因此3D培养的肿瘤球状体(Spheroid)或肿瘤类器官(Organoid)等能更好地模拟体内肿瘤,更利于小分子药物筛选或者肿瘤相关分子机制的研究,也更能准确地预测药物治疗的体内反应、疗效或毒性。同时,2D肿瘤细胞模型体外扩增有一定局限性,在传代后容易丧失原肿瘤的遗传异质性,出现优势克隆选择性,从而降低临床相关性。相比于2D细胞模型,3D细胞球或者类器官很多情况下能提供更可信的研究结果,简化并加速药物评价流程。自2009年小肠类器官首次建立至今,3D细胞和类器官研究已经扩展到很多组织系统,并成为生命科学最热门的领域之一。
按照96孔板每孔需0.1μl Mito-Tracker Red CMXRos染色液(1000X),本产品每50μl可以进行500个样品的检测。