细胞膜绿色荧光染色试剂盒(PKH67),即Cell Plasma Membrane Green Fluorescence Staining Kit with PKH67,是一种以PKH67为荧光探针,并提供了染色增强剂、能快速灵敏地对细胞膜进行绿色荧光染色和标记的试剂盒。
PKH67是一种新型的可用于细胞膜、外泌体标记和示踪的荧光探针,CAS号为257277-27-3,呈现绿色荧光。PKH67结构上带有很长的脂肪族碳尾(Carbon tails),能稳定插入细胞膜、外泌体膜等的脂质区域。PKH67荧光背景低,脂溶性高,荧光染色效果依赖于细胞与膜的类型,主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及长期的体内外细胞示踪研究。PKH67在体内的荧光半衰期为10-12天,因此PKH67非常适合用于示踪研究,也适合用于细胞毒性实验,可与Propidium Iodide/碘化丙啶或7-AAD (7-氨基放线菌素D) 等细胞活力荧光探针联合使用,或者与橙、红色荧光探针例如藻红蛋白、红色荧光蛋白(如RFP、mCherry等)等结合使用。
PKH67可以稳定地与细胞膜脂质区结合并呈现明亮的绿色荧光。其中,最大激发波长为490nm,最大发射波长为502nm。
本试剂盒中的PKH67对细胞的毒性较小,荧光背景低,并且染色细胞后不会使邻近细胞染色,所以除了简单的细胞膜荧光标记外,也被广泛用于体内外的细胞示踪。PKH67标记的细胞形态良好,荧光稳定,可以有效的观察细胞在体外的情况;同时PKH67标记的细胞也可以用于体内观察,可以观察长达数周之久。在细胞增殖中,PKH67的荧光会随着细胞的分裂平均分配到子代细胞中,荧光信号逐级递减。根据这个特性,PKH67也可以用于检测细胞增殖。
本试剂盒提供的Assay Buffer与哺乳动物细胞等渗,且不含去垢剂。在生理pH范围内,PKH67荧光强度通常不受染料定位模式的影响,因此不影响染色效果。但为避免影响细胞活力,不宜将细胞暴露在染色稀释液中过长时间。
本试剂盒提供了Staining Enhancer,使细胞膜染色更加快速,荧光染色更加明亮,染色背景更低。
本试剂盒可以直接染色活的细胞或组织的细胞膜,染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织,通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛固定液进行固定,使用其它固定液可能会导致荧光背景较高。
96孔板每孔检测体系的总体积为100μl时,或每个流式细胞检测的细胞数为100万时,本试剂盒小包装、中包装和大包装分别可以进行50次、250次和1000次检测。