细胞膜红色荧光染色试剂盒(FM4-64),即Cell Plasma Membrane Red Fluorescence Staining Kit with FM4-64,是一种以FM4-64为荧光探针,并提供了Assay Buffer,能快速灵敏地对细胞膜进行红色荧光染色和标记的试剂盒。
FM4-64是一种可用于细胞膜动态观察与标记的荧光探针,其分子式为C30H45Br2N3,分子量为607.51,CAS号为162112-35-8,呈现红色荧光。FM4-64结构中含有亲脂性基团,能够特异并稳定地插入细胞膜的脂质双分子层。FM4-64荧光背景低,光稳定性强,主要应用于细胞体外实时动态观察、细胞膜流动性研究、细胞吞噬过程监测以及细胞间膜融合现象分析等。FM4-64与绿色荧光探针(如FITC、GFP等)光谱重叠度低,在双标或多标实验中,可清晰区分不同标记靶点,不干扰其它荧光信号的检测。
FM4-64可以稳定地插入细胞膜脂质区并呈现明亮的红色/远红荧光。FM4-64显示出较宽的斯托克斯位移,其在细胞膜中的最大激发波长为515nm (激发范围为488-540nm),最大发射波长为760nm (发射范围为640-850nm)。
本试剂盒中的FM4-64对细胞的毒性较小,荧光背景低,可快速染色活细胞的质膜,形成清晰的轮廓。可用于内吞作用追踪,FM4-64通过内吞作用进入细胞,可以动态观察内吞囊泡的形成、运输以及与内体、溶酶体等细胞器的融合过程。FM4-64也是神经科学研究中常用的突触囊泡循环(内吞/外排)示踪染料,可实时监测神经元膜动态、突触囊泡循环以及膜重塑等过程,还可用于植物细胞研究,对植物细胞质膜和内膜系统进行标记。
本试剂盒可以直接染色活的细胞或组织的细胞膜,染色时间通常为1-5分钟。对于固定的细胞或组织,通常宜使用4%多聚甲醛固定液进行固定,使用其它固定液可能会导致荧光背景较高。
本试剂盒提供了用于稀释FM4-64 (1000X)的检测缓冲液(Assay Buffer),该检测缓冲液可以极大程度地保证细胞活力和接近正常的生长状态。
96孔板每孔检测体系的总体积为100μl时,或每个流式细胞检测的细胞数为100万时,本试剂盒小包装和中包装分别可以进行200次和1000次检测。