生物素 AzideBiotin Azide

概述

生物素 Azide（货号 PR01497，CAS号 875770-34-6）是一种含有生物素标签和叠氮基团的点击化学试剂。其叠氮基团可与炔烃发生铜催化的叠氮-炔环加成反应（CuAAC），形成稳定的1,2,3-三唑连接；也可与膦类化合物发生施陶丁格反应。该试剂广泛应用于生物标记、蛋白质组学、细胞成像和亲和纯化等领域。

理化性质

• 分子式：C₁₈H₂₈N₆O₃S（基于典型结构推断）
• 分子量：约 408.52 g/mol
• 外观：白色至类白色固体
• 溶解性：易溶于DMSO、DMF、甲醇等有机溶剂，微溶于水
• 储存条件：-20°C 避光干燥保存
• 纯度：≥95%（HPLC）
• 注意事项：叠氮化合物具有潜在爆炸性，避免与强酸、强氧化剂接触，操作时佩戴防护装备。

应用领域

• 生物分子标记：通过点击化学反应将生物素引入炔烃修饰的蛋白质、核酸等生物分子，用于后续检测或纯化。
• 细胞表面标记：利用叠氮基团与炔烃标记的细胞表面分子反应，实现生物素化，用于流式细胞术或荧光成像。
• 蛋白质组学：用于富集和鉴定新合成的蛋白质（如BONCAT技术）。
• 亲和纯化：生物素化目标分子后，通过链霉亲和素/亲和素树脂进行纯化。
• 药物递送：作为生物素化试剂，用于构建靶向递送系统。

实验方案建议

1. 铜催化点击反应（CuAAC）典型步骤

• 反应体系：将炔烃修饰的分子（如蛋白质）溶于PBS（pH 7.4），加入生物素Azide（终浓度0.1-1 mM）、CuSO₄（1 mM）和抗坏血酸钠（5 mM），室温反应1-2小时。
• 注意事项：铜离子可能对蛋白质活性有影响，可选用铜螯合剂（如THPTA）提高生物相容性；反应需在惰性气氛下进行。

2. 无铜点击反应（SPAAC）

• 若使用环辛炔（如DBCO）修饰的分子，生物素Azide可在无铜条件下发生应变促进的环加成反应，反应条件温和，适用于活细胞标记。

3. 施陶丁格反应

• 生物素Azide可与三苯基膦类化合物反应，生成稳定的酰胺键，适用于无需金属催化的生物偶联。

4. 标记后检测

• 通过SDS-PAGE和Western blot（使用HRP-链霉亲和素）检测生物素化蛋白；或使用链霉亲和素-荧光染料进行成像。

5. 纯化

• 使用链霉亲和素磁珠或琼脂糖树脂进行亲和纯化，洗脱可采用生物素溶液或甘氨酸缓冲液（pH 2.8）。

储存条件

• 储存温度：-20°C，避光、干燥保存。
• 稳定性：在推荐条件下可稳定保存24个月。
• 注意事项：避免反复冻融，建议分装保存；叠氮化合物应远离热源和火源，避免与酸、氧化剂接触。

相关产品推荐

• 生物素 Alkyne：用于与叠氮修饰分子的点击反应。
• DBCO-PEG4-Biotin：无铜点击化学用生物素试剂。
• 链霉亲和素-HRP：用于生物素化分子的检测。
• 链霉亲和素磁珠：用于生物素化分子的亲和纯化。
• 铜催化剂套装：包含CuSO₄和抗坏血酸钠，用于CuAAC反应。