心磷脂绿色荧光染色试剂盒(NAO) (Cardiolipin Green Fluorescence Staining Kit with NAO)是一种以NAO (Nonyl Acridine Orange)为荧光探针，快速灵敏地染色细胞、组织或纯化的线粒体中的心磷脂的试剂盒。本试剂盒可以用于线粒体内膜的荧光标记、检测线粒体动态变化、解析心磷脂富集微域，以及通过荧光染色的强弱分析心磷脂水平的变化。本试剂盒可使用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等荧光检测系统进行检测。

心磷脂(Cardiolipin)是一种富集在真核细胞的线粒体内膜和部分细菌内膜(如革兰氏阴性菌)的磷脂分子，在维持线粒体和细菌膜的结构完整性以及调节膜的生物功能方面起着至关重要的作用。NAO对心磷脂具有高亲和性，是一种特异性结合心磷脂的荧光探针，通过与心磷脂的相互作用可显著增强荧光信号，常用于研究心磷脂的各种特性，例如通过荧光显微镜成像心磷脂、检测细菌中的心磷脂富集微域，在凋亡过程中观察线粒体心磷脂定位和水平的变化。本试剂盒适用于染色和分析线粒体和某些原核生物中的心磷脂，尤其在标记线粒体及心磷脂富集区域、评估细胞凋亡、线粒体损伤和能量代谢等生物过程中具有广泛应用。

NAO (10-Nnonyl acridine orange)，中文名称10-N-壬基吖啶橙，CAS号为75168-11-5，分子式为C26H38BrN3，分子量为472.5，在无水乙醇中的最大激发波长为498nm，最大发射波长为521nm。

本试剂盒染色心磷脂的原理如下。心磷脂具有独特的分子结构特征，包括四条脂肪链和相对较小的头基，使其能够特异性结合NAO。结合后，NAO的荧光强度显著增强。由于NAO同时具有亲脂性和正电荷，在线粒体膜电位的作用下，它可以穿过线粒体外膜并定位于富含心磷脂的内膜区域，实现对线粒体内膜的高特异性荧光标记。因此NAO可以用于标记心磷脂并监测线粒体的动态变化。

本试剂盒可以应用于大多数的真核细胞，包括某些酵母如Saccharomyces cerevisiae，以及原核细胞(如革兰氏阴性菌和沙眼衣原体)。NAO是吖啶橙的衍生物，可穿透正常完整的细胞，NAO在线粒体内的积累依赖于线粒体膜电位，因此本试剂盒采用高纯度、高品质的探针，专为检测活细胞或组织设计，具有良好的兼容性，可适用于后续的细胞固定和通透处理。然而，需注意在染色后进行固定和通透操作可能会导致荧光信号有所减弱。

本试剂盒提供的NAO为1000X溶液，该溶液经过优化，对大多数细胞都适用，但为了得到满意的结果，对于不同类型的细胞请自行进行一定摸索，NAO的终浓度一般为0.5X-2X，最优先的推荐终浓度为1X。本试剂盒提供了染色细胞核的Hoechst 33342，以方便染色观察所有的细胞核。同时，本试剂盒提供了Staining Buffer，该Staining Buffer可在一段时间内维持细胞的正常状态，并给细胞提供一定的营养，通常效果比PBS或HBSS更好。

对于96孔板中的样品，按照每孔使用100μl染色液计算，本试剂盒的小包装和中包装可以进行1000次和5000次检测；如果用于流式细胞仪检测，按照每个样品的检测体系体积为0.5ml时，本试剂盒的小包装和中包装可以进行200次和1000次检测；对于6孔板中的贴壁培养细胞样品，按照每孔使用1ml染色液计算，本试剂盒的小包装和中包装可以进行100次和500次检测。