Cy7.5-乙基 琥珀酰亚胺酯（近红外）Cy7.5-E SE (NIR)

概述

Cy7.5-乙基琥珀酰亚胺酯（近红外）是一种基于花青素染料Cy7.5的近红外荧光标记试剂，属于NHS酯类活化衍生物。该产品货号为PR01388，CAS号为786620-92-6（氯化物形式）。其NHS酯基团可与生物分子表面的伯胺基团在温和条件下共价偶联，形成稳定的酰胺键，实现荧光标记。该染料发射波长位于近红外区（>800 nm），具有低背景荧光和强组织穿透性，适用于活体成像、荧光免疫印迹和细胞成像等生物医学研究。

理化性质

光谱特性：Cy7.5的激发和发射波长位于近红外区，适合深层组织成像。

应用领域

• 小动物活体成像：利用近红外荧光实现深层组织穿透，用于肿瘤、炎症等模型的非侵入性成像。
• 荧光免疫印迹：标记二抗，用于Western Blot等检测，背景低，灵敏度高。
• 细胞成像：标记抗体或配体，用于细胞表面或胞内靶点的荧光成像。
• 流式细胞术：标记抗体，用于多色流式分析（需配备近红外检测通道）。
• 生物分子标记：蛋白质、多肽、胺基修饰核酸的共价荧光标记。
• 药物递送研究：标记纳米载体或药物，追踪体内分布。

实验方案建议

1. 储备液配制

• 使用无水DMF或DMSO溶解Cy7.5-乙基琥珀酰亚胺酯，建议浓度1-10 mM。
• 溶解后应立即使用，或分装后-20°C避光保存，避免反复冻融。

2. 标记反应（以抗体标记为例）

• 缓冲液：使用不含伯胺的缓冲液（如PBS或碳酸盐缓冲液），pH 7.2-8.5。避免使用Tris、甘氨酸等含胺缓冲液。
• 抗体准备：将抗体溶于上述缓冲液，浓度建议1-2 mg/mL。若含胺缓冲液，需先透析或脱盐。
• 摩尔比：染料:抗体摩尔比通常为3:1至10:1，需根据预实验优化。
• 反应：将染料储备液加入抗体溶液，轻柔混匀，室温避光反应1-2小时。
• 纯化：使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或透析去除游离染料。

3. 标记度（DOL）测定

• 使用紫外-可见分光光度计或荧光分光光度计测定标记产物的吸光度。
• Cy7.5的消光系数和校正因子需参考产品说明书。
• 计算DOL：DOL = (A_max / ε_dye) / (A_280 / ε_protein)，其中A_max为染料最大吸收，A_280为蛋白吸收（需扣除染料在280 nm的贡献）。

4. 注意事项

• 避光操作：全程避免强光照射。
• 反应pH：低于7会降低偶联效率，高于9可能导致染料水解。
• 染料水解：NHS酯在水溶液中易水解，应现配现用。
• 对照实验：建议设置未标记抗体对照和竞争抑制实验。
• 储存：标记产物在4°C避光保存，可加入0.1% NaN3防腐。

储存条件

• 未开封产品：建议-20°C避光、干燥保存，有效期见标签。
• 运输条件：室温运输，但收到后应立即按上述条件储存。
• 储备液：溶解后分装，-20°C避光保存，避免反复冻融，建议6个月内使用。
• 标记产物：4°C避光保存，避免长时间暴露于光下，可添加防腐剂。

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