死细胞远红荧光染色试剂盒(Nuclear Far-red 7),即Dead Cell Far-red Fluorescence Staining Kit with Nuclear Far-red 7 (也称DRAQ7),是一种快速、高效、便捷的基于Nuclear Far-red 7探针特异地对坏死细胞的细胞核进行染色的试剂盒。本试剂盒染色后可用于荧光显微镜或流式细胞仪等荧光检测。
Nuclear Far-red 7,也称DRAQ7 (Deep Red Anthraquinone 7),是一种非细胞膜渗透性的蒽醌类DNA结合染料,不能穿过具有生物活性的细胞质膜,只能穿过死细胞膜的无序或破损区域而进入细胞核,嵌入DNA双螺旋结构中并在激发后发射远红荧光,因此Nuclear Far-red 7仅能对死细胞染色,从而被用来区分正常细胞与坏死细胞。Nuclear Far-red 7的激发光波长范围为488至647nm,最大激发波长分别为599nm和644nm。488nm、514nm和568nm谱线可作为次优激发波长选择(通常仅适用于流式细胞术检测)。其发射光谱范围覆盖665nm至远红光区,游离状态下最大发射波长为678nm,与双链DNA嵌合时最大发射波长为694nm。当使用流式细胞仪检测时,使用蓝色激光激发,可以使用PerCP-Cy 5.5或PerCP-eFluo 710的滤光片组进行检测;使用红色激光激发,推荐使用Cy5的带通滤光片(Bandpass filter, BP)或长通滤光片(Longpass filter, LP)组进行检测。当使用荧光显微镜检测时,可以使用黄光至红光进行最佳激发,推荐使用远红长通滤光片,例如695LP、715LP或780LP进行检测。
Nuclear Far-red 7不受紫外光激发,发射光谱位于远红波段,与常用的FITC、PE、DAPI、Hoechst、PI、7-AAD等染料的发射光谱重叠很小,因此可与多种荧光标记物联用,尤其适用于绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白以及异硫氰酸荧光素(FITC)和藻红蛋白(PE)标记的抗体,是进行复杂的多色流式细胞分析或显微成像分析的理想选择。由于其活细胞膜不通透性,对活细胞生理活动干扰相对较小(但仍需注意浓度和孵育时间),可以用于活细胞成像和流式分析中实时或终点细胞死亡检测。另外,在需要避免紫外光或需与其它染料兼容的场景下,Nuclear Far-red 7也可用于细胞周期评估。
本试剂盒内提供的Nuclear Far-red 7 (100X)为储存液,推荐Nuclear Far-red 7的使用浓度为1X,孵育时间为10分钟。为了达到良好的染色效果,建议根据自身实验条件和细胞或组织摸索Nuclear Far-red 7的使用浓度与染色时间。
本试剂盒内提供Assay Buffer,可以简单便捷地进行细胞坏死检测,同时又能维持正常细胞的状态。
以96孔板为例,本试剂盒小包装可以进行100次染色,中包装的可以进行500次染色。