ER-Tracker Green染色试剂盒( ER-Tracker Green Assay Kit),是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等的活细胞内质网染色的试剂盒。仅需染色20分钟就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的活细胞内质网绿色荧光染色。
ER-Tracker Green采用BODIPY® FL进行了荧光标记的glibenclamide。Glibenclamide即glyburide,中文名称为格列本脲,是一种常用2型糖尿病的治疗药物,可以高度结合主要定位在内质网上的包含ATP敏感的钾离子通道(KATP channel)的磺脲类(Sulphonylurea)受体。因此荧光标记的glibenclamide就可以用作内质网特异性的荧光探针。ER-Tracker Green适用于活细胞内质网的荧光染色,但不适合用于固定细胞内质网的荧光染色。
ER-Tracker Green呈绿色荧光,检测时最大激发光波长为504nm,最大发射光波长为511nm。
本产品适用范围广。本产品可用于各种方法培养出的3D细胞球或类器官,包括超低吸附细胞培养板、基质胶或Matrigel包被的平板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。
本产品使用便捷,整个检测过程仅需约30分钟即可完成。对于常规的3D细胞活细胞染色,仅需将本试剂盒中的ER-Tracker Green染色液(250X)按照相应比例用 ER-Tracker Green Assay Buffer配制成 ER-Tracker Green检测工作液,避光孵育20分钟即可进行荧光检测。
传统的细胞培养大多以二维(Two-dimensional, 2D)的形式展开,但2D培养的细胞在生长方式、生长形态、分化和功能等方面都与体内生理条件下细胞的真实形态和结构存在明显差异,可能会因为细胞结构和组织形态的缺失,使实验结果的可信度降低。三维(Three-dimensional, 3D)细胞培养能够更好地模拟体内细胞生存的微环境,更能代表体内组织,也能更真实的反映细胞与细胞间、细胞与基质间的相互作用,细胞对外源性和内源性刺激的应答也更接近于它们在体内的反应,3D细胞培养从而成为更有价值并更为可信的体外实验模型,能够获得与体内实验更加一致的实验结果。
3D肿瘤细胞模型越来越多地被用于了解疾病机制和药物研发。2D培养的肿瘤细胞,其单侧细胞膜可以均匀地获得营养和氧气,而3D培养的肿瘤细胞团的内部细胞获得营养和氧气的机会更少,形成自然的营养和氧气梯度,能更好地模拟体内微环境条件,因此3D培养的肿瘤球状体(Spheroid)或肿瘤类器官(Organoid)等能更好地模拟体内肿瘤,更利于小分子药物筛选或者肿瘤相关分子机制的研究,也更能准确地预测药物治疗的体内反应、疗效或毒性。同时,2D肿瘤细胞模型体外扩增有一定局限性,在传代后容易丧失原肿瘤的遗传异质性,出现优势克隆选择性,从而降低临床相关性。相比于2D细胞模型,3D细胞球或者类器官很多情况下能提供更可信的研究结果,简化并加速药物评价流程。自2009年小肠类器官首次建立至今,3D细胞和类器官研究已经扩展到很多组织系统,并成为生命科学最热门的领域之一。
按照96孔板每孔需要0.4μl ER-Tracker Green染色液(250X),本试剂盒小包装可以进行50个样品的检测。