Lyso-Tracker Green染色液(1000X) (Lyso-Tracker Green Staining Solution, 1000X),是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等的活细胞溶酶体染色的溶液。仅需染色10分钟就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的活细胞溶酶体绿色荧光染色。
Lyso-Tracker Green是一种溶酶体(Lysosome)绿色荧光探针,能通透细胞膜,可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。
Lyso-Tracker Green采用DND-26进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针,其中仅弱碱可部分提供质子,以维持pH在中性,可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中,从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性红(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色,但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。Lyso-Tracker Green适用于活细胞染色,但不适合用于固定后细胞的染色。
Lyso-Tracker Green是嗜酸性荧光探针,用于活细胞内酸性细胞器的标记和示踪。这些探针具有几个重要特征,包括高度选择靶向酸性细胞器和在纳摩尔浓度有效标记活细胞。Lyso-Tracker Green必须在极低浓度(通常约50nM)下才能获得优异的选择性。这些探针的滞留(Retention)机制虽然没有被研究清楚,但很可能与酸性细胞器的质子化和滞留性有关,Lyso-Tracker Green探针的内吞作用动力学研究显示染料进入活细胞的摄入时间仅几秒即可。然而,这些溶酶体探针会导致溶酶体被碱化,长期孵育会诱使溶酶体pH值的增加。因此,建议成像前用探针孵育细胞的时间不能太久。Lyso-Tracker Green探针具体使用浓度和孵育时间需要根据自身实验条件和具体细胞种类来进行摸索以达到满意的染色效果。
Lyso-Tracker Green的分子式为C18H26BClF2N4O,分子量为398.7,其最大激发光波长为504nm,最大发射光波长为511nm。
Lyso-Tracker Green适用于活细胞溶酶体的荧光染色,但不适合用于固定细胞溶酶体的荧光染色。如果经Lyso-Tracker Green染色后的细胞需要进行固定操作,可以尝试3%的戊二醛(Glutaraldehyde)。
本产品适用范围广。本产品可用于各种方法培养出的3D细胞球或类器官,包括超低吸附细胞培养板、基质胶或Matrigel包被的平板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。
本产品使用便捷,整个检测过程仅需约10-30分钟即可完成。对于常规的3D细胞活细胞染色,仅需加入本产品避光孵育10分钟即可进行荧光检测。
传统的细胞培养大多以二维(Two-dimensional, 2D)的形式展开,但2D培养的细胞在生长方式、生长形态、分化和功能等方面都与体内生理条件下细胞的真实形态和结构存在明显差异,可能会因为细胞结构和组织形态的缺失,使实验结果的可信度降低。三维(Three-dimensional, 3D)细胞培养能够更好地模拟体内细胞生存的微环境,更能代表体内组织,也能更真实的反映细胞与细胞间、细胞与基质间的相互作用,细胞对外源性和内源性刺激的应答也更接近于它们在体内的反应,3D细胞培养从而成为更有价值并更为可信的体外实验模型,能够获得与体内实验更加一致的实验结果。
3D肿瘤细胞模型越来越多地被用于了解疾病机制和药物研发。2D培养的肿瘤细胞,其单侧细胞膜可以均匀地获得营养和氧气,而3D培养的肿瘤细胞团的内部细胞获得营养和氧气的机会更少,形成自然的营养和氧气梯度,能更好地模拟体内微环境条件,因此3D培养的肿瘤球状体(Spheroid)或肿瘤类器官(Organoid)等能更好地模拟体内肿瘤,更利于小分子药物筛选或者肿瘤相关分子机制的研究,也更能准确地预测药物治疗的体内反应、疗效或毒性。同时,2D肿瘤细胞模型体外扩增有一定局限性,在传代后容易丧失原肿瘤的遗传异质性,出现优势克隆选择性,从而降低临床相关性。相比于2D细胞模型,3D细胞球或者类器官很多情况下能提供更可信的研究结果,简化并加速药物评价流程。自2009年小肠类器官首次建立至今,3D细胞和类器官研究已经扩展到很多组织系统,并成为生命科学最热门的领域之一。
按照96孔板每孔需0.1μl Lyso-Tracker Green染色液(1000X),本产品每50μl可以进行500个样品的检测。