Senescence衰老细胞绿色荧光染色试剂盒(SA-Green),即Senescence Green Fluorescence Staining Kit with SA-Green,是一种使用SA-Green绿色荧光探针特异性地检测细胞内衰老相关β-半乳糖苷酶(Senescence-associated β-gal, SA-β-gal)的活性,从而特异性识别衰老细胞的高灵敏度荧光检测试剂盒。本试剂盒既可用于活细胞染色,也可用于固定细胞或组织冰冻切片的染色。根据所检测的样品,可使用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等荧光检测系统进行检测。
绝大多数正常细胞被认为仅具备有限的分裂能力,在停止分裂后就会逐渐进入衰老(Senescence)状态。此时细胞仍然是存活的,但细胞的RNA的转录谱和蛋白表达谱发生了巨大改变。衰老细胞不能再发生有丝分裂,并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊,不同于某些损伤诱导的细胞休眠(Dormancy),也不同于细胞生长接触抑制产生的细胞静默(Quiescence)。细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式,但累积的衰老细胞同时也是生物体老化(Aging)的直接原因。追踪衰老细胞通常依赖于检测衰老细胞的标记物和表型特征,如SA-β-gal、细胞周期抑制蛋白p16和p21、衰老相关分泌表型(Senescent associated secretory phenotype, SASP)等。其中,SA-β-gal是最为广泛接受和使用的细胞衰老生物标志物。
SA-Green染色活细胞时,可以进入细胞膜后,在SA-β-gal的酶促反应下迅速产生荧光,最终可固定在细胞内的蛋白质上而滞留在细胞内。SA-Green被SA-β-gal催化后的产物的最大激发波长约为530nm,最大发射波长约为550nm,实际检测时可以采用常见的检测绿色荧光的参数设置,或自行适当优化检测波长。
本试剂盒检测特异性强、灵敏度高。本试剂盒能够检测低水平的SA-β-gal活性,能兼容衰老早期细胞等SA-β-gal酶活性较低的情况,且能够特异性识别SA-β-gal,确保检测的高灵敏度和准确性。
本试剂盒可用于活细胞检测,操作简单,使用方便。常规的β-gal检测法方法是基于β-gal催化X-gal生成深蓝色产物,如细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒、溶酶体β-半乳糖苷酶染色试剂盒。类似的基于X-gal显色的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒方法都无法进行活细胞或活体检测。本试剂盒使用的SA-Green是一种细胞膜通透性荧光探针,可以对活细胞进行荧光染色,并且可与其它活细胞荧光染色方法结合使用。使用时,只需进行简单孵育,就可实时检测活细胞的衰老。本试剂盒同样也适用于固定细胞或冰冻组织切片的染色。碧云天还提供一种新型的可用于体内或体外、高亮度、高稳定性、高特异性、高生物安全性并快速便捷地检测衰老细胞的近红外荧光探针Senescence衰老细胞近红外荧光探针。
对于活细胞检测,本试剂盒同时提供了Endogenous β-gal Inhibitor (1000X)和SAup (1000X)。其中Endogenous β-gal Inhibitor可抑制活细胞中内源性非衰老相关的β-gal活性,可在抑制背景的基础上特异地检测出衰老特异性β-gal的活性。SAup是一种诱导细胞衰老的阳性对照试剂。两者的终浓度通常为0.5-2X,最优先的推荐终浓度为1X。
对于细胞样品,按照96孔板中的样品每孔使用100μl SA-Green染色工作液计算,本试剂盒小包装和中包装分别可以检测200和1000个样品;对于组织冰冻切片样品,按照每个切片需要50μl SA-Green染色工作液计算,本试剂盒小包装和中包装分别可以检测400和2000个样品;按照6孔板中的样品每孔使用1ml SA-Green染色工作液计算,本试剂盒小包装和中包装分别可以检测20和100个样品。