三标四色多重荧光染色试剂盒(488/555/647/DAPI)，英文名为Triple Label Four-Color Multiplex Fluorescence Staining Kit (488/555/647/DAPI)，简称多重免疫组化染色(mIHC)、多重荧光组化、多色免疫荧光(mIF)、荧光多色标记或多重染色，是一种基于酪酰胺信号放大技术对细胞或组织样品进行多重荧光染色的试剂盒。

本试剂盒可同时标记和检测1-3种目的蛋白。本试剂盒包含Tyramide-488、555和647三种荧光染料，配合相应一抗和二抗，可同时标记最多三种目的蛋白，一抗使用量少、荧光强度高、信号稳定，可用于多色标记和定位研究，尤其适用于低丰度靶标和复杂样品的检测。本产品适用于石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、细胞涂片等细胞或组织样品的多重荧光染色。

本试剂盒可以突破多重免疫荧光染色时的抗体种属限制。本试剂盒每种抗体染色后可以去除相应的一抗和二抗，因此对于一抗的种属来源没有特殊要求，既适用于相同来源的一抗，也适用于不同来源的一抗。本试剂盒采用的TSA技术几乎完美解决了抗体种属选择的限制，在设计抗体组合时只需根据各抗体的效价和相应的荧光颜色选择最优的抗体。

酪酰胺信号放大(Tyramide signal amplification)技术，简称TSA，也称催化信号放大(Catalyzed signal amplification/CSA、Catalyzed reporter deposition/CARD)技术，由于其信号放大及多重染色的特点，被广泛应用于IF (Immunofluorescence)、IHC (Immunohistochemistry)和ISH (In situ hybridization)等技术中，是检测细胞和组织中极低丰度或低丰度的靶抗原最灵敏的方法之一，在不损失样品分辨率的条件下可以显著提升靶抗原检测的精度和灵敏度。

TSA是一种基于酶催化反应的高灵敏度信号放大技术，其主要原理是通过辣根过氧化物酶(HRP)催化酪酰胺底物(Tyramide-substrate，如Tyramide-488、Tyramide-Biotin等)生成含高活性自由基(Free radicals)的酪酰胺底物，即活性酪酰胺底物(Active Tyramide-substrate)，这些自由基与邻近蛋白质如酪氨酸残基(Tyrosine residues)共价结合，从而在目标位点附近(约0.1-1μm)沉积大量标记物(如特定的荧光探针或生物素等)，实现信号级联放大。本系列试剂盒信号级联放大的原理请参考图1A。在第一轮一抗和二抗孵育以及TSA Reagent反应结束后，可以通过增强型免疫染色抗体洗脱液或热修复法去除非共价结合在靶抗原上的抗体复合物，同时又稳定保留共价结合的荧光探针。后续可不必考虑上一轮实验中抗体的交叉干扰，即可直接使用不同或相同种属来源的抗体进行后续轮次的孵育，从而标记其它靶抗原。

本试剂盒采用了的新型增强型免疫染色抗体洗脱液，无须37ºC孵育，通常仅需室温孵育10分钟就能有效洗脱抗体。和常规的免疫染色抗体洗脱液相比，操作更简单、洗脱更高效、条件更温和。

对于组织切片、细胞爬片或涂片、96孔板细胞样品，按照每个样品需要50μl TSA染色工作液计算，本试剂盒小包装和中包装分别可用于100或400个样品的靶蛋白的三重荧光标记检测。如果用于靶蛋白的单色荧光标记，可以检测的样品数量约为三色荧光标记的3倍。