Di-4-ANEPPDHQ 膜电位荧光探针（近红外）Di-4-ANEPPDHQ Membrane Potential Fluorescent Probes (NIR)

概述

Di-4-ANEPPDHQ 膜电位荧光探针（近红外）是一种快速响应的膜电位染料，本身无荧光，与细胞膜结合后发出荧光。其荧光变化可检测毫秒级瞬态膜电位变化，适用于可兴奋细胞。在多种组织、细胞及细胞膜模型中，荧光变化幅度均一，每100 mV膜电位变化通常引起约10%的荧光改变。该产品货号为PR01128，CAS号797785-10-5。

理化性质

• CAS号：797785-10-5
• 分子式：C₄₄H₆₂N₂O₂（基于结构推测）
• 分子量：约651.0 g/mol
• 外观：可能为红色至深红色固体
• 溶解性：易溶于有机溶剂如DMSO、DMF、乙醇；难溶于水
• 荧光特性：与膜结合后激发/发射波长约480/700 nm（近红外范围）
• 储存条件：-20°C避光干燥保存
• 稳定性：对光敏感，需避光操作

应用领域

• 神经科学：检测神经元动作电位和突触电位
• 心脏电生理：研究心肌细胞膜电位变化及心律失常
• 药物筛选：评估药物对离子通道或膜电位的影响
• 细胞生物学：监测细胞膜电位动态变化
• 组织工程：评估工程化组织的电生理功能
• 膜模型研究：用于脂质双分子层或囊泡的膜电位测量

实验方案建议

1. 染料配制

• 使用无水DMSO溶解染料，配制成1-5 mM储备液，分装后-20°C避光保存。
• 实验前用缓冲液（如HBSS或PBS）稀释至工作浓度（通常1-10 μM），避免血清干扰。

2. 细胞染色

• 对于贴壁细胞：吸除培养基，用预温缓冲液洗涤一次，加入含染料的工作液，37°C避光孵育5-15分钟。
• 对于悬浮细胞：离心收集，重悬于含染料的工作液中，37°C避光孵育5-15分钟。
• 染色后可用缓冲液洗涤1-2次，去除未结合染料。

3. 荧光检测

• 使用配备合适滤光片（激发~480 nm，发射~700 nm）的荧光显微镜或酶标仪。
• 对于快速膜电位变化，建议使用高速成像系统（如sCMOS相机）或膜片钳联用。
• 记录基线荧光，加入刺激后连续采集荧光信号，计算ΔF/F。

4. 校准与定量

• 可使用缬氨霉素（K⁺载体）在不同K⁺浓度下校准膜电位，建立荧光-电压曲线。
• 每100 mV膜电位变化约对应10%荧光变化，可根据此比例估算膜电位改变。

5. 注意事项

• 染料需避光操作，避免反复冻融。
• 工作液现配现用，避免长时间放置。
• 染色浓度和时间需根据细胞类型优化，避免过度染色导致毒性。
• 近红外探针可能受组织自发荧光干扰较小，但仍需设置未染色对照。

储存条件

• 粉末形式：-20°C避光干燥保存，有效期通常为2年。
• 储备液：用无水DMSO配制后，分装于避光管中，-20°C保存，避免反复冻融，建议3个月内使用。
• 运输条件：室温避光运输，收到后立即按上述条件储存。
• 注意事项：避免接触强光、潮湿和高温；使用前平衡至室温再开盖，防止吸潮。

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