名称:DCFH-DA 活性氧荧光探针（绿色） 
品牌: Medlife
CAS号:4091-99-0
货号:PR01190
规格:50mg
 

活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）作为细胞代谢的副产物，在信号转导、免疫防御及细胞凋亡中发挥双重作用。然而，ROS过度积累会引发氧化应激，导致DNA损伤、脂质过氧化及蛋白质变性，与癌症、神经退行性疾病及衰老等密切相关。DCFH-DA（2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯）作为经典的ROS荧光探针，凭借其高灵敏度、细胞渗透性及实时检测能力，成为研究氧化应激机制的核心工具。本文将从探针原理、实验优化及科研应用三方面，解析DCFH-DA在生命科学领域的创新价值。

技术原理：从非荧光到绿色荧光的转化

DCFH-DA的分子设计巧妙融合了“酯酶响应”与“ROS氧化”双重机制：

细胞渗透与酯酶水解：DCFH-DA为脂溶性非荧光分子，可自由穿透细胞膜。进入细胞后，细胞质中的酯酶将其水解为DCFH（2',7'-二氯二氢荧光素），失去乙酸基团后滞留于细胞内。
ROS氧化与荧光激活：在氧化环境中（如H₂O₂、·OH、O₂⁻⁻等存在时），DCFH被氧化为强荧光产物DCF（2',7'-二氯荧光素），其激发/发射波长为488/525 nm（绿色荧光），荧光强度与ROS水平呈正相关。实验表明，DCF的荧光量子产率达0.8，较传统探针（如DHR123）提升3倍，确保低浓度ROS的精准检测。

实验流程优化：从样本处理到数据分析

1. 样本制备与探针负载

细胞样本：将贴壁细胞（如HeLa、SH-SY5Y）接种于共聚焦培养皿，培养至70%融合度。用无血清培养基洗涤3次后，加入终浓度10 μM DCFH-DA（溶于无血清培养基），37℃孵育20分钟。
组织样本：新鲜组织切片需先用胶原酶消化为单细胞悬液，再按细胞样本流程处理。例如，小鼠脑组织经0.25%胶原酶IV消化后，DCFH-DA负载效率较未消化样本提高40%。

2. 氧化刺激与时间控制

化学诱导：加入H₂O₂（终浓度100 μM）或抗霉素A（10 μM）诱导线粒体ROS爆发，分别模拟外源性及内源性氧化应激。
物理刺激：紫外线照射（UV-A, 365 nm, 10 mW/cm²）或冷应激（4℃处理30分钟）可激活细胞ROS生成通路。
时间窗口：DCFH-DA的氧化反应在刺激后5-30分钟达峰值，建议在此区间内完成荧光检测。例如，H₂O₂处理后，DCF荧光强度在15分钟时较基线升高5.2倍。
3. 荧光检测与定量分析

流式细胞仪：设置FITC通道（530/30 nm）检测DCF阳性细胞比例。例如，在阿尔茨海默病模型神经元中，DCF阳性率从对照组的12%升至Aβ处理组的68%，证实氧化应激的病理作用。
共聚焦显微镜：通过Z-stack扫描获取三维荧光图像，结合ImageJ软件计算平均荧光强度（MFI）。实验显示，线粒体定位的DCF荧光强度较细胞质高2.3倍，提示线粒体为ROS主要产生部位。
高通量孔板检测：使用酶标仪（激发485 nm，发射535 nm）检测96孔板样本，通量达100样本/小时。例如，在药物筛选中，该法可快速鉴定抗氧化剂（如NAC）的IC₅₀值（半数抑制浓度）。

科研应用场景与突破性发现

1. 疾病机制研究

在帕金森病模型中，DCFH-DA探针揭示多巴胺能神经元（SH-SY5Y细胞）在6-羟基多巴胺（6-OHDA）处理后，ROS水平较对照组升高8倍，且与细胞凋亡率（Annexin V阳性率）呈显著正相关（R²=0.91）。进一步研究证实，抗氧化剂（如维生素E）可降低ROS水平并减少细胞死亡，为神经保护治疗提供理论依据。

2. 药物研发与毒性评估

在抗癌药物筛选中，DCFH-DA探针用于评估化疗药物（如顺铂）的氧化毒性。实验显示，顺铂（10 μM）处理A549肺癌细胞24小时后，ROS水平升高3.5倍，同时伴随线粒体膜电位下降（JC-1探针验证），揭示氧化应激为顺铂细胞毒性的关键机制。此外，该探针还可用于纳米材料（如量子点、碳纳米管）的生物安全性评价，避免传统MTT法因氧化干扰导致的假阳性结果。

3. 环境毒理学研究

在重金属污染监测中，DCFH-DA探针检测到镉（Cd²⁺, 10 μM）处理的小麦根尖细胞ROS水平较对照组升高6倍，且与脂质过氧化产物（MDA）含量呈正相关（p<0.01）。该结果为重金属污染土壤的生物修复策略提供数据支持。

技术局限性与改进方向

局限性

特异性限制：DCFH-DA对·OH和H₂O₂的响应灵敏度较高，但对O₂⁻⁻的检测能力较弱（需结合超氧阴离子专用探针如DHE）。
光稳定性问题：DCF在持续光照下易发生光漂白，建议检测时间控制在10分钟内，或采用低强度激光扫描。

DCFH-DA活性氧荧光探针以其独特的氧化响应机制与高灵敏度，成为揭示细胞氧化应激机制的核心工具。其在疾病研究、药物开发及环境监测中的广泛应用，不仅推动了生命科学领域的理论创新，也为临床治疗与生态保护提供了技术支撑。未来，随着纳米技术与人工智能的融合，DCFH-DA探针有望实现单细胞分辨率的ROS动态追踪，为精准医学与绿色化学开辟新路径。

订购：400-086-2158

来源：https://www.med-life.cn/product/1296794.html