名称:NucGreen/EthD-III 活死细菌双染试剂盒（绿色，红色） 
品牌: Medlife
货号:PR01073
规格:100T
规格:20T

细菌活力评估是微生物学、抗生素研发及环境监测等领域的核心环节。传统方法依赖培养基生长测定，但无法区分“膜受损但具备修复能力”的细菌与“完全失活”的个体。NucGreen/EthD-III双染试剂盒通过荧光标记技术，突破这一局限，实现活/死细菌的精准区分。该试剂盒以绿色荧光染料NucGreen标记所有细菌（活/死），红色荧光染料EthD-III特异性结合死细菌DNA，通过双通道荧光信号叠加，为细菌活力分析提供高分辨率、高灵敏度的解决方案。

技术原理与染料特性

1. NucGreen：广谱核酸染料

NucGreen是一种膜渗透性DNA染料，其激发/发射波长为503/530 nm（绿色荧光），可穿透活细菌细胞膜并与双链DNA结合。该染料对革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）和革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）均具有高效染色能力，且在室温下稳定性优异，避免传统SYBR系列染料易降解的问题。实验表明，NucGreen在0.85% NaCl溶液中的荧光信号强度与细菌DNA含量呈线性关系，适用于定量分析。

2. EthD-III：死细菌特异性标记

EthD-III（溴化乙锭同源物）为红色荧光染料（激发/发射波长530/620 nm），仅能穿透膜受损的死细菌细胞膜，与DNA结合后发出强荧光。其与DNA的亲和力较传统染料（如PI）提升45%，且背景信号更低。例如，在异丙醇处理的死大肠杆菌样本中，EthD-III的荧光强度是活菌样本的12倍以上，确保死细菌检测的特异性。

实验流程与操作优化

1. 样本制备与对照设置

活/死细菌对照：将细菌培养至对数生长期，通过异丙醇处理制备死菌样本，与活菌按比例混合（如活:死=1:1），用于验证染色特异性。
样本洗涤：使用0.85% NaCl溶液离心洗涤细菌3次，去除培养基残留（如核酸或蛋白质），避免干扰染料结合。实验显示，未洗涤样本的荧光背景值较洗涤样本高30%，显著影响结果准确性。
2. 染色工作液配制

将NucGreen（2 mM）与EthD-III（2.5 mM）按1:2体积比混合，加入8倍体积0.85% NaCl溶液，制备100×染色工作液。例如，1 μL NucGreen + 2 μL EthD-III + 8 μL NaCl溶液可标记100 μL菌悬液（终浓度：NucGreen 20 μM，EthD-III 50 μM）。该浓度适用于多数革兰氏阴性菌，但需根据菌株特性调整（如革兰氏阳性菌建议NucGreen浓度降至10 μM）。

3. 荧光检测与数据分析

荧光显微镜：使用FITC（绿色）和Cy3（红色）通道分别观察活/死细菌。合并图像中，活菌呈现纯绿色，死菌呈现黄绿色（绿色+红色叠加）。
流式细胞仪：通过FITC通道检测NucGreen阳性细胞（活菌），PE通道检测EthD-III阳性细胞（死菌）。实验数据显示，该试剂盒对大肠杆菌的活/死区分准确率达98.7%，较传统平板计数法提升15%。科研应用场景与案例

1. 抗生素敏感性测试

在卡那霉素梯度浓度（0-100 μg/mL）处理的大肠杆菌样本中，NucGreen/EthD-III双染试剂盒可实时监测细菌存活率。结果显示，MIC值为50 μg/mL时，死菌比例达92%，与生长测定结果高度一致，但检测时间缩短至4小时（传统方法需24小时）。

2. 生物膜形成研究

在铜绿假单胞菌生物膜模型中，该试剂盒揭示生物膜内部存在“活菌核心-死菌外壳”结构。通过三维共聚焦显微镜重建，发现死菌层厚度与抗生素渗透阻力呈正相关（R²=0.89），为生物膜耐药机制研究提供新视角。

3. 环境微生物监测

在污水处理厂活性污泥样本中，NucGreen/EthD-III双染试剂盒检测到死菌比例与化学需氧量（COD）呈显著正相关（p<0.01），表明该试剂盒可用于评估污水处理效率。

高特异性：EthD-III仅标记死菌，避免传统染料（如PI）对活菌的非特异性结合。
操作简便：无需固定或透化步骤，15分钟完成染色与检测。
多平台兼容：支持荧光显微镜、流式细胞仪及高通量孔板检测。

膜修复干扰：部分膜受损细菌可能在营养培养基中恢复活性，导致EthD-III标记假阳性。建议结合生长测定验证结果。
染料浓度优化：不同菌株需调整染料浓度（如厚壁菌门细菌需提高NucGreen浓度至50 μM）。
 

NucGreen/EthD-III双染试剂盒通过荧光双标记技术，为细菌活力分析提供了高效、精准的工具。其在抗生素研发、环境监测及微生物生态研究中的应用，显著提升了实验通量与数据可靠性。未来，随着微流控芯片与AI图像分析技术的融合，该试剂盒有望实现单细胞分辨率的动态监测，推动微生物学研究进入精细化时代。

订购：400-086-2158

来源：https://www.med-life.cn/product/1296532.html