名称:Cy5-NHS 活化酯 
品牌: Medlife
CAS号:1032678-42-4
货号:PC21411
规格:1mg/价格:¥803.00
规格:3mg/价格:¥1583.00
规格:5mg/价格:¥1895.00
规格:25mg/价格:¥5483.00
链接:https://www.med-life.cn/product/29127.html

一、Cy5-NHS酯：荧光标记技术的“核心引擎”

Cy5-NHS酯（Cyanine 5 N-Hydroxysuccinimide Ester）是一种基于花菁染料（Cyanine）的远红色荧光标记试剂，其核心结构由Cy5染料与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活性酯基团组成。该设计实现了两大功能突破：

远红色荧光特性：Cy5的激发波长为649 nm，发射波长为670 nm，处于生物组织自发荧光的低背景区域，可显著提升信噪比，适用于深层组织成像与多色荧光分析。
高效共价标记：NHS酯基团可特异性识别生物分子中的伯氨基（-NH₂），在pH 7.2-8.5条件下快速形成稳定酰胺键，标记效率达90%以上。

二、技术原理：从分子设计到标记反应

1. 染料结构优化
Cy5染料通过延长共轭π电子体系，将发射波长从传统荧光素的520 nm红移至670 nm，同时保持高摩尔消光系数（ε≈250,000 M⁻¹cm⁻¹）与量子产率（Φ≈0.28）。其硫醚键结构增强了光稳定性，半衰期较Cy3提升3倍，适用于长时间活体成像。

2. 标记反应机制
NHS酯基团作为活性中间体，通过以下步骤实现靶向标记：

氨基捕获：与目标分子（如蛋白质、肽段、寡核苷酸）的赖氨酸残基侧链氨基或N端氨基发生亲核取代反应。
酯键水解：反应副产物N-羟基琥珀酸根离子（HO-Su）自然脱离，生成稳定的Cy5-生物分子共轭物。
条件优化：推荐使用pH 8.0的磷酸盐缓冲液（PBS），反应时间30-60分钟，Cy5-NHS酯与目标分子的摩尔比为1:5-1:10。

三、科研应用场景与案例解析

1. 蛋白质组学研究

亚细胞定位追踪：在HeLa细胞中，用Cy5-NHS酯标记微管蛋白（Tubulin），通过共聚焦显微镜观察到细胞分裂期微管动态组装过程，分辨率达200 nm。
蛋白相互作用分析：将Cy5标记的抗体与免疫共沉淀（Co-IP）技术结合，揭示p53蛋白与MDM2泛素连接酶的相互作用，荧光强度与蛋白结合量呈线性相关（R²=0.99）。
2. 核酸研究

寡核苷酸探针制备：标记DNA/RNA探针用于荧光原位杂交（FISH），在乳腺癌组织切片中定位HER2基因扩增区域，信号强度较传统FITC标记提升5倍。
miRNA检测：设计Cy5修饰的锁核苷酸探针，通过茎环结构与目标miRNA结合，在单分子水平实现miR-21的定量检测，检测限低至10 fM。
3. 活体成像与药物递送

肿瘤靶向成像：将Cy5标记的抗EGFR抗体（西妥昔单抗）注射至小鼠皮下瘤模型，24小时后肿瘤部位荧光信号强度是周围组织的8倍，清晰显示肿瘤边界。
纳米载体示踪：标记脂质体纳米粒（粒径100 nm），通过小动物活体成像系统（IVIS）监测其在血液循环中的半衰期（t₁/₂≈4.2小时）及肿瘤组织蓄积量（占注射剂量12%）。
4. 多色荧光分析

流式细胞术：与Cy3、FITC等染料联用，实现T细胞亚群（CD4⁺/CD8⁺）与活化标志物（CD25、CD69）的同步检测，通道间串扰<5%。
超分辨显微镜：在STORM（随机光学重建显微镜）技术中，Cy5的闪烁特性（单分子定位精度<20 nm）支持亚细胞结构（如线粒体嵴）的三维重构。

四、技术优势与操作指南

1. 核心优势

高灵敏度：远红色荧光穿透力强，适用于厚组织样本（如脑切片、肿瘤组织）。
化学稳定性：标记产物在4℃下可保存6个月，荧光强度衰减<10%。
生物相容性：标记后的蛋白质/核酸保持原有活性，在ELISA、Western blot等实验中无背景干扰。
2. 操作注意事项

避免氨基竞争：反应体系中需排除含伯氨基的杂质（如Tris缓冲液），推荐使用硼酸盐缓冲液（pH 8.5）。
控制反应温度：高温（>37℃）可能导致NHS酯水解，建议25℃下反应。
纯化步骤：标记后需通过超滤（MWCO 10 kDa）或凝胶过滤去除未反应染料，避免假阳性信号。

五、未来趋势：从工具到系统的升级

随着单细胞测序与空间组学的发展，Cy5-NHS酯的应用正从单一标记向多维分析拓展：

代码化标记：结合光点击化学（Photo-Click Chemistry），实现多色、可逆的动态标记。
AI辅助设计：通过机器学习预测染料-靶标结合亲和力，优化标记条件。
临床转化：开发Cy5标记的诊疗一体化探针，实现术中肿瘤边界实时导航。

订购：400-086-2158

来源：https://www.med-life.cn/product/29127.html