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发布日期:2024/4/15 11:49:00
  1. 透射电镜鉴定法:简称TEM,观察外泌体双层囊膜超微结构,通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。

Théry, Clotilde, et al."Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatantsand biological fluids." Currentprotocols in cell biology(2006): 3-22.

2、透射电镜鉴定法:简称TEM,该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快,检测后能提供外泌体粒径和

浓度信息。

3、分子标志物检测:WB法鉴定细胞外囊泡的标志蛋白是否存在于样品中(至少3个阳性标志物、1个阴性标志

切)

外泌体相关文献统计,排在前4位的检测指标为CD63、TSG101、CD9、CD81;接着检测较多的4个指标为Alix HSP70、flotillin和Syntenin等。然而《MISEV 2018》并未提出可以特异性地表征外泌体的分子标记。仅列出了必须在所有外囊泡制剂中分析的类标记物,以证明外囊泡(类别1和2)并评估其从常见污染物中的纯度(类别3)。

类别1:跨膜或GPI锚定蛋白,质膜和/或胞内体上任何类型外囊泡的标志,如CD63、CD81、CD82、CD9等

类别2:细胞溶质蛋白(cytosolic proteins ,真核细胞和革兰氏阳性细菌)或周质蛋白(periplasmicproteins,革兰氏阴性细菌),分析确定脂质双分子层结构,如TSG101、HSP70、ALIX等;

类别3:非外囊泡结构的主要成分,通常与外囊泡共同分离。主要用来评估外囊泡制剂的纯度,如血清、血浆中的脂蛋白。

即《MISEV 2018》要求外泌体标志物鉴定,至少2个阳性指标:CD9、CD63、CD81 三选一以及TSG101、HSP70、ALIX三选一,另外纯度鉴定再加阴性对照。

 

注:图片来源于protocol丨外泌体免疫胶体金电镜经验分享,如有侵权,联系侵删

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