在生物分子示踪、免疫分析及活体成像研究中,荧光标记的特异性与稳定性直接决定了对生物过程的解析精度。磺化 Cy5-NHS 活化酯作为一种水溶性近红外荧光标记试剂,凭借其对氨基(-NH₂)的高特异性反应活性、优异的光稳定性及无需有机溶剂助溶的特性,成为科研人员标记蛋白质、多肽、抗体等生物分子的 “理想工具”,为多维度生物过程可视化研究提供清晰的荧光信号支持。
三大核心研究场景,解锁水溶性标记潜力
生物分子的 “精准标记平台”:在蛋白质标记实验中,磺化 Cy5-NHS 活化酯可在生理 pH(7.0-8.5)条件下与赖氨酸残基的 ε- 氨基高效反应(标记效率>90%),生成稳定的酰胺键连接产物。例如,标记单克隆抗体时,其水溶性特性避免了传统 Cy5-NHS 因使用 DMF/ DMSO 引发的蛋白聚集(聚集率降低至 5% 以下),且标记后抗体的抗原结合活性保持率>95%,适用于流式细胞术、免疫荧光等对蛋白活性敏感的实验。标记后的生物分子在 646nm 激发下发射 662nm 近红外荧光,可有效避开生物自发荧光干扰,信噪比提升 3-5 倍。
细胞与组织成像的 “深层穿透探针”:在活细胞成像中,磺化 Cy5 标记的探针(如靶向肽、纳米载体)可通过细胞膜进入细胞,近红外荧光的强组织穿透能力使其能清晰显示深层组织(如肿瘤异种移植模型的皮下肿瘤,成像深度达 500μm)的分布情况。在免疫组化实验中,其标记的二抗可与抗原 - 一抗复合物特异性结合,经共聚焦显微镜观察,能分辨组织切片中单个细胞的亚细胞定位(如细胞膜、细胞质),较可见光荧光探针的光漂白速率降低 60%,适合长时间动态观察。
体外诊断与高通量筛选的 “信号放大器”:在 ELISA、微阵列芯片等检测平台中,磺化 Cy5-NHS 标记的检测抗体可作为信号报告分子,通过荧光强度量化分析目标抗原的含量。在新冠病毒抗体检测实验中,其标记的抗人 IgG 抗体可将检测灵敏度提升至 0.1ng/mL,且批间变异系数<8%,满足临床级检测需求。在药物筛选中,标记的候选化合物与靶点蛋白的结合效率可通过荧光偏振或荧光共振能量转移(FRET)快速评估,适配 96 孔 / 384 孔板高通量体系,检测速度较传统方法提升 10 倍。
科研级优势,保障标记可靠性
高水溶性与生物相容性:磺化基团赋予其优异的水溶性(溶解度>10mg/mL),无需有机溶剂助溶即可直接用于水相反应,避免生物分子变性;对细胞毒性极低(10μM 浓度处理 24 小时,细胞存活率>90%),适合活细胞标记实验。
高稳定性与反应可控性:纯度≥95%(HPLC 检测),在 0.1M 碳酸钠缓冲液中 4℃可稳定保存 1 周;反应条件温和(室温孵育 30 分钟即可完成标记),通过调节试剂与底物的摩尔比(推荐 10:1 至 20:1)可精准控制标记密度,避免过度标记导致的生物活性下降。
多平台兼容性:兼容荧光显微镜、流式细胞仪、红外成像系统及微 plate 读板仪等设备,可与其他荧光染料(如 FITC、Cy3)进行多色标记,实现多靶标同时检测,满足复杂生物体系的研究需求。
从生物分子的精准标记到深层组织成像,再到体外诊断应用,磺化 Cy5-NHS 活化酯以 “水溶性 + 近红外优势” 的特性,成为荧光标记领域的高效工具。清晰的生物过程解析,从选择优质的标记试剂开始!
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